非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——水解

時間：2023-03-25 04:12:08來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——水解

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

9.1.4 殘留分析技術(shù)

9.1.4.1 前處理方法

生物樣品中的非甾類同化激素類藥物常與葡糖苷酸、硫酸形成軛合物，這些軛合物極性和水溶性較高、熱穩(wěn)定性差，與原形藥物性質(zhì)差異大，前處理中容易損失，需要將其水解后再處理。文獻(xiàn)報道的主要有酶水解和酸水解方法。

(1)水解方法

1)酶水解

非甾類同化激素類藥物的酶水解常使用芳基硫酸酯酶、葡糖醛酸糖苷酶及其混合物。

Yang等利用酶水解提取肌肉(豬肉、牛肉和蝦)、牛奶和肝臟中的50種同化激素類藥物(包括DIS、HES和DES)。在5g樣品中加入10mL乙酸鹽緩沖液(0.2mol/L，pH5.2)，再加入100μL葡糖醛酸糖苷酶/芳基硫酸酯酶，37℃過夜，甲醇提取，固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)檢測。方法的定量限(LOQ)為0.04～2.0μg/kg，平均回收率為76.9%～121.3%，變異系數(shù)(CV)為2.4%～21.2%。許泓等利用酶水解提取動物源性食品中DES、HES和DIS殘留。5.0g樣品，用叔丁基甲基醚提取，在40℃水浴氮吹儀中吹去殘余叔丁基甲基醚后，加入80uL β-葡糖苷酸酶，于52℃烘箱中放置過夜，為保證酶解效率須將叔丁基甲基醚除凈。提取液硅膠柱凈化，LC-MS/MS測定。方法對DES、DIS的檢出限(LOD)為0.05ng/g，在0.5～10ng/g范圍內(nèi)回收率為84%～108%，

對HES的LOD為0.025ng/g，在0.25～5ng/g范圍內(nèi)回收率為59%～87%。

彭濤等利用酶水解提取動物肝臟中的RALs(TAL、a-ZOL、β-ZOL、ZER、ZAN、ZON)。在約5.0g均質(zhì)后的動物肝臟樣品中加入10mL乙酸鈉緩沖溶液(0.05mol/L)和0.025mL β-葡萄糖苷酸/硫酸酯復(fù)合酶，旋渦混勻，于37℃水浴中振蕩水解12h，乙醚提取，HLB固相萃取柱凈化，LC-MS/MS檢測。在添加濃度1～4μg/kg范圍內(nèi)，方法回收率在70%～90%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于20%；6種RALs的判斷限(CCa)在0.17～0.31μg/kg之間，檢測能力(CCβ)在0.26～0.42μg/kg之間。曹瑩等利用酶水解提取雞肝臟中ZER殘留。取5.0g雞肝勻漿于50mL離心管中，加入5mL 50mmol/L的乙酸鈉緩沖液，加入25μL β-葡萄糖苷酸酶，旋渦混勻，于37℃培養(yǎng)箱中酶解12h，乙醚提取，液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)分析，方法的LOQ為4ng/g，回收率為65.0%～86.4%，CV為5.1%～15.4%。

Kathrin等利用酶水解方法提取牛尿液中二苯乙烯類化合物(DES、DIS、HES)與RALs(ZER、TAL、a-ZOL、β-ZOL和ZON)。5mL尿液樣品中加入2mL乙酸鈉緩沖液(2mol/L，pH5.2)，加入100μL蝸牛液(Helix pomatia juice)，37℃避光放置16h或50℃放置3h，水解完成后氫氧化鈉溶液(2mol/L)調(diào)pH9.0±0.1，5mL乙醚提取2次，固相萃取柱凈化，LC-MSMS分析。方法檢測二苯乙烯類化合物和RALs的LOD分別低于1μg/L和1.5ug/L，回收率分別為99.2%～106.0%和99.4%～107.9%。

2) 酸水解

文獻(xiàn)也有報道非甾類同化激素類藥物常與脂蛋白類結(jié)合，所以用酸水解可以提高回收率。Barkatina等認(rèn)為與酶水解相比較，酸水解更有利于提高回收率，因為食物中的非甾類同化激素類藥物主要與脂蛋白類廣泛結(jié)合，與葡糖醛酸的結(jié)合物較少。將10g徹底絞碎的肉樣品中加入25mL水，均質(zhì)2min后轉(zhuǎn)移到平底燒瓶，加入50mL乙醚，振蕩30min后轉(zhuǎn)移到分液漏斗，收集乙醚層并經(jīng)無水硫酸鈉過濾，乙醚重復(fù)提取1次，合并提取液并蒸干。5～10mL乙醚和約1mL濃鹽酸加到蒸干的提取物中，調(diào)pH1～2，55℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸餾，殘留物轉(zhuǎn)移到分液漏斗，加入100mL水、15g硫酸銨和25mL三氯甲烷，收集三氯甲烷層并經(jīng)無水硫酸鈉過濾，檢測肉和肉制品中DES等藥物殘留，該方法LOD分別為0.2mg/L和0.3mg/L，回收率為75%～80%。

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