非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——提取

時間：2023-03-25 04:10:36來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——提取

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(2)提取方法

非甾類同化激素殘留分析主要采用液液萃取(LLE)的方法提取。近年來，一些新的提取技術(shù)，如超聲波輔助提取(UAE)、加速溶劑萃取(ASE)等也開始應(yīng)用到非甾類同化激素殘留的提取中。

1)液液萃取(liquid liquid extraction，LLE)

A.二苯乙烯類

二苯乙烯類化合物在弱極性和中等極性的有機(jī)溶劑中有較好的溶解性，常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醚、叔丁基甲基醚、乙酸乙酯、三氯甲烷和乙腈等。

Yang等用甲醇提取豬肉、牛肉、蝦、牛奶和肝臟的水解液，經(jīng)固相萃取柱凈化后，LC-MSMS檢測。DIS、HES和DES的LOQ為0.04～2.0μg/kg，平均回收率為76.9%～121.3%，CV為2.4%～21.2%。應(yīng)永飛等建立了動物組織中DIS、HES和DES殘留量的檢測方法。試樣中的藥物經(jīng)甲醇超聲提取后，過HLB固相萃取柱凈化、氮吹至干，用流動相溶解后進(jìn)行LC-MS/MS測定，以D8-DES為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行定量分析。方法LOD為0.2μg/kg，LOQ均為0.5μg/kg；加標(biāo)濃度在0.5～10μg/kg范圍內(nèi)，動物組織中DIS、HES和DES的回收率為78.8%～110.9%，批內(nèi)RSD小于或等于8.0%。許泓等利用叔丁基甲基醚提取動物源性食品中DES、HES和DIS殘留，經(jīng)硅膠固相萃取柱凈化后，LC-MS/MS測定。方法對DES、DIS的LOD為0.05ng/g，在0.5～10ng/g范圍內(nèi)回收率為84%～108%；對HES的LOD為0.025ng/g，在0.25～5ng/g范圍內(nèi)回收率為59%～87%。Reuvers等先用叔丁基甲醚提取組織樣品中的DES殘留，再用1mol/L氫氧化鈉提取，經(jīng)C18固相萃取柱凈化后，HPLC檢測。該方法LOD為0.5～2.0μg/kg，回收率為66%。

張琴等用乙醚提取雞肉樣品中的DES，經(jīng)IAC凈化后，儀器檢測。高效液相色譜(HPLC)檢測方法的LOD為22.2ng/g，回收率為63.7%～67.6%；氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)檢測方法的LOD為0.33ng/g，回收率為54.1%～67.3%。vanPeteghem等用乙醚提取肉水解液中的DES殘留，過固相萃取柱凈化后，放射免疫(RIA)測定。LOD達(dá)0.07ng/g，回收率為64%～115%。

Li等用乙腈-丙酮溶液(4+1，v/v)提取雞和蝦組織中的DES，三氯甲烷脫脂，ELISA檢測。該方法的LOD為600pg/mL，回收率大于79.5%，日內(nèi)、日間CV低于6%。

尹怡等用乙酸乙酯超聲提取水產(chǎn)品中的DES，過弗羅里硅土(Florisil)小柱進(jìn)行凈化，GC-MS測定。方法回收率大于80%，LOD為0.5μg/kg。吳銀良等用10%碳酸鈉溶液和乙酸乙酯提取動物組織中DES、DIS和HES，硅膠固相萃取柱凈化，GC-MS分析。方法的LOD為0.30μg/kg (DES)、0.10μg/kg(HES)和0.15μg/kg(DIS)；在0.5～4.0μg/kg添加水平，回收率為73.0%～86.5%，RSD為1.0%～7.2%。

Coffin等利用DES溶解于堿性溶液的性質(zhì)，用NaOH溶液和三氯甲烷反復(fù)萃取動物組織中的DES殘留，衍生化后，氣相色譜(GC)檢測。其LOD可達(dá)2～10μg/L，回收率為70%～110%。Tirpenou等用苯和NaOH溶液提取樣品中的DES，經(jīng)硅膠柱凈化后GC檢測，方法回收率達(dá)到81%。

B.RALs

RALs屬于二羥基苯甲酸內(nèi)酯類化合物，其苯環(huán)上都有2個羥基，呈弱酸性，具有高度相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，文獻(xiàn)報道的提取溶劑有乙醚、叔丁基甲基醚、乙腈和甲醇等。

彭濤等對乙醚、丙酮、正已烷和乙酸乙酯對RALs的提取效率進(jìn)行了比較研究，結(jié)果顯示乙醚的提取效率最高。動物肝臟中RALs在酸性環(huán)境中經(jīng)β-葡萄糖苷酸/硫酸酯復(fù)合酶水解后，加入無水乙醚，振蕩提取，經(jīng)HLB固相萃取柱凈化后，LC-MS/MS檢測。在添加濃度1～4μg/kg范圍內(nèi)，方法回收率在70%～90%之間，RSD小于20%。6種RALs的CCa在0.17～0.31μg/kg之間，CCβ在0.26～0.42μg/kg之間。曹瑩等用乙醚提取雞肝酶解液，經(jīng)液液分配凈化后，用LC-MS分析ZER殘留。方法的LOQ為4ng/g，回收率為65.0%～86.4%，CV為5.1%～15.4%。方曉明等用乙醚提取雞肝β-葡糖苷酸酶酶解液，氫氧化鈉抽提，C18小柱凈化后，用HPLC檢測。樣品的加標(biāo)平均回收率為72.0%～80.4%，RSD為8.3%～13.9%，LOQ為5μg/kg。Shin等用叔丁基甲基醚提取老鼠血清中的ZON，經(jīng)液液分配凈化后，HPLC分析。方法回收率為79.3%～96.2%，日內(nèi)和日間CV低于12.1%，LOQ為10ng/mL。

Xia等采用乙腈提取牛奶中的ZER、TAL、ZAN、ZON、a-ZOL和β-ZOL，過MAX柱凈化后，LC-MS/MS分析。方法平均回收率為92.6%～112.5%，CV低于11.4%，LOD和LOQ分別為0.01～0.05μg/L和0.05～0.2μg/L。張清杰等用乙腈提取牛奶和奶粉中的6種玉米赤霉醇及其類似物，經(jīng)免疫親和柱凈化后，用HPLC檢測。方法添加回收率均為80%～110%，CV均小于12%。錢卓真等利用乙腈提取水產(chǎn)品中的ZER、TAL、ZAN、ZON、a-ZOL和β-ZOL，乙腈飽和正己烷脫脂，氨基固相萃取柱凈化后，LC-MSMS分析。方法LOQ為1.0μg/kg，回收率為75.9%～103.8%，RSD為3.90%～13.5%。Zhang等采用甲醇提取牛肌肉中的ZER、TAL、ZAN和a-ZOL，經(jīng)免疫親和柱(IAC)凈化，衍生化后，用GC-MS檢測。該方法LOD為0.5μg/kg，在1.0～5.0μg/kg添加范圍內(nèi)，回收率為79.6%～110.7%，CV為3.2%～11.4%。

C.二苯乙烯類和RALs同時提取

Kathrin等利用乙醚同時提取牛尿液中二苯乙烯類化合物(DES、DIS、HES)和RALs(ZER、TAL、a-ZOL、β-ZOL和ZON)。5mL尿液樣品中加入2mL乙酸鈉緩沖液(2mol/L，pH5.2)，加入100μL蝸牛液(Helix pomatia juice)，37℃避光放置16h或50℃放置3h，水解完成后，用氫氧化鈉溶液(2molL)調(diào)pH9.0±0.1，5mL乙醚提取2次，旋轉(zhuǎn)蒸干，加入1.5mL甲醇和3mL水，2mL正已烷洗滌2次，棄掉正己烷層，固相萃取柱凈化，LC-MS/MS分析。方法檢測二苯乙烯類化合物和RALs的LOD分別低于1μg/L和1.5μg/L，回收率分別為99.2%～106.0%和99.4%～107.9%。

2)加速溶劑萃取(accelerated solvent extraction，ASE)

ASE是指在提高的溫度(50～200℃)和壓力(1000～3000psi或10.3～20.6MPa)下用溶劑萃取固體或半固體樣品的新穎樣品前處理方法。與傳統(tǒng)提取方式相比，ASE速度快、溶劑用量少、萃取效率高、待測組分回收率好，可實現(xiàn)全自動安全操作。在非甾類同化激素殘留分析的前處理也有文獻(xiàn)報道。

Gadzala-Kopciuch等建立了ASE提取組織中的ZON及其代謝產(chǎn)物a-ZOL。使用雞肌肉和肝臟組織進(jìn)行添加回收試驗，對甲醇-水、乙腈-水，以及它們的不同比例混合進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈-水(84+16，v/v)回收率最高(ZON和a-ZOL的回收率分別為95.4%和97.9%)，共萃取雜質(zhì)少；正己烷脫脂會影響回收率；純?nèi)軇?甲醇、乙腈、三氯甲烷等)提取的回收率較差。ASE的最佳條件為：壓力1500psi，溫度200℃，靜態(tài)萃取時間5min，靜態(tài)循環(huán)5次，沖洗溶劑體積為池容積的75%(約11mL)。該方法檢測ZON和a-ZOL的LOD分別為8.10ng/g和14.02ng/g，LOQ分別為24.30ng/g和42.06ng/g。

3)超聲輔助萃取(ultrasound-assisted extraction，UAE)

UAE是利用超聲波輻射壓強(qiáng)產(chǎn)生的強(qiáng)烈機(jī)械振動、擾動效應(yīng)、乳化、擴(kuò)散、擊碎和攪拌等多級效應(yīng)，增大物質(zhì)分子運(yùn)動頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標(biāo)成分進(jìn)入溶劑，促進(jìn)提取的進(jìn)行。優(yōu)點是萃取速度快，價格低廉、效率高。有文獻(xiàn)報道采用UAE技術(shù)來提高非甾類同化激素的萃取效率。

Zhang等以甲醇為提取溶劑，常溫超聲30min，提取肉中的DES，再在堿性條件下(pH10.3)用氯仿分三次萃取，化學(xué)發(fā)光方法檢測。方法的回收率為93.1%～104.5%，CV低于3.0%，LOD為0.75～1.12pg/mL。應(yīng)永飛等以甲醇為提取溶劑，在60℃下超聲5min，提取動物組織中的DIS、DES、HES等二苯乙烯類藥物，LC-MS/MS測定。方法的LOD為0.2μg/kg，LOQ為0.5μg/kg；在0.5～10μg/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為78.8%～10.9%，批內(nèi)RSD小于等于8.0%。周建科等采用UAE方法提取中老年奶粉中的DES。奶粉樣品中加入石油醚，超聲萃取5min，離心，棄去石油醚，再加入乙腈，超聲萃取5min，離心，取下層乙腈，氮氣濃縮并定容至0.2mL，進(jìn)HPLC測定。DES的LOD為0.025mg/L，RSD在1.55%～3.46%之間，平均回收率在85.0%以上。

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