食品蘇丹紅測(cè)定

小編 / 2022-10-09 15:37

蘇丹紅的檢測(cè)方法有高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、薄層層析法等。在此介紹高效液相色譜法(依據(jù)《GB/T19681-2005食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法》)。

　　1.原理

　　樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相色譜紫外可見光檢測(cè)器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。

　　2.試劑

　　(1)乙腈：色譜純。

　　(2)丙酮：色譜純、分析純。

(3)甲酸：分析純。

　　(4)乙醚：分析純。

　　(5)正已烷：分析純。

　　(6)無水硫酸鈉：分析純。

　　(7)層析柱管：1cm(內(nèi)徑)×5cm(高)的注射器管。

(8)層析用氧化鋁(中性100～200目)：105℃干燥2h，于干燥器中冷卻至室溫，每100g中加入2mL水降活，混勻后密封，放置12h后使用。

(9)氧化鋁層析柱：在層析柱底部塞入一薄層脫脂棉，干法裝入處理過的氧化鋁至3cm高，輕輕壓實(shí)后加一薄層脫脂棉，用10mL正己烷預(yù)淋洗，洗凈柱中雜質(zhì)后，備用。

　　(10)5%丙酮的正己烷液：吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。

　　(11)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：蘇丹紅I、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ;純度≥95%。

(12)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取蘇丹紅I、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ及蘇丹紅Ⅳ各10.0mg(按實(shí)際含量折算)，用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。

　　3.儀器

　　(1)高效液相色譜儀(配有紫外可見光檢測(cè)器)。

　　(2)分析天平：感量0.1mg。

(3)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

　　(4)均質(zhì)機(jī)。

　　(5)離心機(jī)。

　　(6)0.45um有機(jī)濾膜。

　　4.操作步驟(以紅辣椒粉等粉狀樣品為例)

(1)前處理稱取1～5g(準(zhǔn)確至0.001g)樣品于三角瓶中，加入10mL到30mL正己烷，超聲5min，過濾，用10mL正已烷洗滌殘?jiān)鼣?shù)次，至洗出液無色，合并正己烷液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5mL以下，慢慢倒入氧化鋁層析柱中，為保證層析效果，在柱中保持正己烷液面為2mm左右上樣，在全程的層析過程中不應(yīng)使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗濃縮瓶，一并注入柱中。控制氧化鋁表層吸附的色素帶寬宜小于0.5cm，待樣液完全流出后，視樣品中含油類雜質(zhì)的多少用10～30mL正己烷洗柱，直至流出液無色，棄去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脫，收集、濃縮后，用丙酮轉(zhuǎn)移并定容至5mL，經(jīng)0.45um有機(jī)濾膜過濾后待測(cè)。

　　(2)測(cè)定

　　①推薦色譜條件：

色譜柱：ZotbaxSB-C18 3.5um 4.6mm×150mm(或相當(dāng)型號(hào)色譜柱);流動(dòng)相：溶劑A0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85：15，溶劑B 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20;梯度洗脫條件：見表6-8;柱溫：30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：蘇丹紅1478nm;蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ520nm;于蘇丹紅I出峰后切換。

　　表6-8梯度洗脫條件

②標(biāo)準(zhǔn)曲線：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6mL，用正已烷定容至25mL，此標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0，0.16，0.32，0.64，1.28，2.56ug/mL，各進(jìn)樣量10uL，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　5.結(jié)果計(jì)算

　　式中X——樣品中蘇丹紅含量，mg/kg

p——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中蘇丹紅的濃度，ug/mL

　　V——樣液定容體積，mL

　　m——樣品質(zhì)量，g

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