氯霉素類藥殘留測定——微生物法和免疫PCR法

時間：2023-03-25 07:21:47來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

氯霉素類藥殘留測定——微生物法和免疫PCR法

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

4.1.4.2測定方法

CAPs殘留分析的測定方法主要有微生物法、免疫分析法、薄層色譜法、毛細管電泳法、色譜及色質(zhì)聯(lián)用法等。基于抗原抗體特異性反應(yīng)建立起來的免疫學(xué)測定方法具有靈敏度較高、特異性強、預(yù)處理簡單、分析時間短等優(yōu)點，目前已經(jīng)研制出一些成熟的試劑盒產(chǎn)品，使用方便，有著廣闊的應(yīng)用前景色譜方法可檢出樣品中痕量的殘留藥物，具有檢測限低、精確度高等特點：而色質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)更是目前唯一有效的確證手段，但是存在著操作復(fù)雜、時間長、成本較高的問題。

(1)微生物法(microbiological analysis， MA)

微生物法的主要原理是樣品中如有抗生素殘留，則會對培養(yǎng)基中的細菌產(chǎn)生抑菌圈，可以根據(jù)抑菌圈的有無及大小來判定結(jié)果。此種方法簡便、費用低，但耗時長，敏感性和專一性低，易漏檢，也會出現(xiàn)假陽性，引起誤判，僅適用于對高殘留量樣品進行篩檢。梅先芝等采用棉簽法(STOP)測定鯉魚肌肉組織殘留的CAP，用棉簽采集組織液后，置于枯草桿菌培養(yǎng)基中，保溫過夜，觀察抑菌圈有無及大小判斷殘留。該方法LOD為1.00u/g。焦彥朝等采用氯化三苯基四氮唑法(TTC)測定鯉魚肌肉組織CAP殘留，通過用TTC染色，量取抑菌圈直徑，計算檢測限及回收率。該方法平均回收率為51.3%～69.2%，LOD為0.25ug/g。

6)免疫PCR法(immuno polymerase chain reaction， IPCR)

IPCR是利用抗原抗體反應(yīng)的特異性和PCR擴增反應(yīng)的極高靈敏性而建立的一種微量抗原檢測技術(shù)。是用一段已知DNA分子標(biāo)記抗體作為探針，用此探針與待測抗原反應(yīng)，PCR擴增黏附在抗原抗體復(fù)合物上的這段DNA分子，電泳定性，根據(jù)特異性PCR產(chǎn)物的有無，來判斷待測抗原是否存在。劉京在制備CAP全抗原的基礎(chǔ)上，研制抗CAP單克隆抗體，利用抗CAP單克隆抗體建立IPCR分析法，檢測牛奶中CAP的殘留。以BSA、OVA為載體蛋白，采用EDC法制備CAP全抗原，免疫小鼠，制備抗CAP多克隆抗體。采用細胞融合和雜交瘤分選技術(shù)，經(jīng)過篩選和亞克隆，成功獲得能穩(wěn)定分泌抗CAP單克隆抗體的細胞株1B7，接種于Balb/c小鼠腹腔，得到的小鼠腹水經(jīng)純化后效價為1：512000。以該抗體建立ELISA競爭抑制標(biāo)準曲線，IC50和LOD分別為7.39ng/mL、0.24ng/mL，與CAPs的交叉率高達2052.8%，與其他藥物未見明顯交叉。當(dāng)抗原包被濃度為10μg/mL，生物素酰化抗體的工作濃度為1：64000，親和素工作濃度為10μg/mL，生物素標(biāo)記的DNA投入量為10pg時，建立的IPCR方法LOD為1.380pg/mL，批內(nèi)、批間CV均小于10%。用于牛奶樣品中CAP檢測時，回收率為86.8%～106.0%，RSD為4.94%～7.51%。

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