氯霉素類藥殘留測定——免疫分析法（二）

時間：2023-03-25 07:18:48來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

氯霉素類藥殘留測定——免疫分析法（二）

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

2)放射免疫分析法(radioimmunoassay， RIA)

RIA技術是使用以放射性同位素(如125I、32P、3H等)作標記的抗原或抗體，利用同位素標記的抗原和未標記的抗原與抗體發生競爭抑制反應，用γ射線探測儀或液體閃爍計數器測定γ射線或β射線的放射性強度，來測定抗體或抗原含量的技術。近年來有研究人員采用該技術對動物組織中的CAP殘留進行了檢測。盡管該方法靈敏度非常高(RIA通常為10-9 g、10-12 g，甚至10-15 g)，應用范圍廣，但進行RIA需使用昂貴的計數器，且存在放射線輻射和污染等問題，因此在獸藥殘留檢測領域的應用和發展受到了一定的限制，并逐步為其他免疫分析方法所取代。

Armold等開發了RIA法測定雞蛋、牛奶、動物肌肉中的CAP殘留。當采用高特異性的羊抗血清時，除了酰基側鏈的代謝物外，交叉反應并不顯著，TAP并不反應。凈化的目的是除去脂質，脫脂牛奶可以直接稀釋檢測。該方法LOD為0.2ug/kg，lug/kg以上的CAP能被準確定量，回收率為85%，與GC-ECD的結果相比沒有顯著差異。徐美奕等采用RIA法測定了對蝦中CAP殘留量，方法LOD為0.15×10-12，可作為水產品中CAP殘留量的有效檢測手段。黃曉蓉等建立了RIA受體免疫分析方法快速篩檢烤鰻中CAP殘留，靈敏度高，LOD可達0.3μg/kg。

利用抗生素功能基與微生物細胞結合部位的結合反應特性，集RIA、ELISA、生物發光技術、液體閃爍技術為一體進行抗生素殘留的快速檢測，亦得到較廣泛研究和應用。美國食品與藥品管理局(FDA)推薦使用的CHARM II快速篩檢方法，樣品處理簡單，檢測時間短，基本滿足實際樣品檢測的需要。McMullen等應用此方法檢測蜂蜜中的CAP殘留，LOD為0.3ug/kg。倪梅林等也用CHARM II快速篩檢蝦仁中CAP殘留量，精密度為5.5%，LOQ能達到0.1μg/kg。

3)熒光免疫分析(fluoroimmunoassay， FIA)

FIA是利用免疫反應的高度特異性和標記示蹤物的高度靈敏性相結合而建立的一類非放射性的新興檢測技術。近年來以其特出的優點逐漸為人們所重視。郭艷宏等采用反相微乳技術合成了熒光稀土銪二氧化硅納米顆粒，用其與CAP單克隆抗體結合制備CAPs殘留物免疫檢測探針，對牛奶中CAP及其琥珀酸鹽同步檢測，簡便快速，30min內得出結果。與TAP、慶大霉素、磺胺二甲基嘧啶之間無交叉反應，特異性好，未發現非特異性吸附問題。Li等利用單克隆抗體建立了時間分辨-熒光免疫分析(TR-FIA)方法檢測水產品中的CAP。方法LOD為0.04ng/g，LOQ為0.15ng/g；批內CV小于10%，批間CV小于13.3%；平均回收率在83.7%～109.6%之間，CV為8.3%～1.5%；與ELISA方法相比具有很好的相關性。Zhang等采用Eu3+標記抗CAP單克隆抗體，開發了一種新型的雙標記TR-FIA方法檢測豬組織中的CAP。方法LOD為0.06ng/g，在添加濃度0.1～5ng/g范圍，豬肉中的回收率為102%～121%。分析結果與ELISA和GC-MS方法的相關性為0.92～0.98。Gasilova等建立了一種熒光偏振免疫分析(FPIA)方法用于檢測牛奶中的CAP。選擇雙抗體和熒光素標記抗原的最佳配對，對使用飽和硫酸銨溶液處理牛奶樣品進行了優化，對測試過程的分析特性進行了確定。整個分析過程不超過10min，方法LOD為20ug/kg。

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