氯霉素類藥殘留測(cè)定——免疫分析法（二）

時(shí)間：2023-03-25 07:18:48來源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

氯霉素類藥殘留測(cè)定——免疫分析法（二）

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

2)放射免疫分析法(radioimmunoassay， RIA)

RIA技術(shù)是使用以放射性同位素(如125I、32P、3H等)作標(biāo)記的抗原或抗體，利用同位素標(biāo)記的抗原和未標(biāo)記的抗原與抗體發(fā)生競(jìng)爭抑制反應(yīng)，用γ射線探測(cè)儀或液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定γ射線或β射線的放射性強(qiáng)度，來測(cè)定抗體或抗原含量的技術(shù)。近年來有研究人員采用該技術(shù)對(duì)動(dòng)物組織中的CAP殘留進(jìn)行了檢測(cè)。盡管該方法靈敏度非常高(RIA通常為10-9 g、10-12 g，甚至10-15 g)，應(yīng)用范圍廣，但進(jìn)行RIA需使用昂貴的計(jì)數(shù)器，且存在放射線輻射和污染等問題，因此在獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用和發(fā)展受到了一定的限制，并逐步為其他免疫分析方法所取代。

Armold等開發(fā)了RIA法測(cè)定雞蛋、牛奶、動(dòng)物肌肉中的CAP殘留。當(dāng)采用高特異性的羊抗血清時(shí)，除了酰基側(cè)鏈的代謝物外，交叉反應(yīng)并不顯著，TAP并不反應(yīng)。凈化的目的是除去脂質(zhì)，脫脂牛奶可以直接稀釋檢測(cè)。該方法LOD為0.2ug/kg，lug/kg以上的CAP能被準(zhǔn)確定量，回收率為85%，與GC-ECD的結(jié)果相比沒有顯著差異。徐美奕等采用RIA法測(cè)定了對(duì)蝦中CAP殘留量，方法LOD為0.15×10-12，可作為水產(chǎn)品中CAP殘留量的有效檢測(cè)手段。黃曉蓉等建立了RIA受體免疫分析方法快速篩檢烤鰻中CAP殘留，靈敏度高，LOD可達(dá)0.3μg/kg。

利用抗生素功能基與微生物細(xì)胞結(jié)合部位的結(jié)合反應(yīng)特性，集RIA、ELISA、生物發(fā)光技術(shù)、液體閃爍技術(shù)為一體進(jìn)行抗生素殘留的快速檢測(cè)，亦得到較廣泛研究和應(yīng)用。美國食品與藥品管理局(FDA)推薦使用的CHARM II快速篩檢方法，樣品處理簡單，檢測(cè)時(shí)間短，基本滿足實(shí)際樣品檢測(cè)的需要。McMullen等應(yīng)用此方法檢測(cè)蜂蜜中的CAP殘留，LOD為0.3ug/kg。倪梅林等也用CHARM II快速篩檢蝦仁中CAP殘留量，精密度為5.5%，LOQ能達(dá)到0.1μg/kg。

3)熒光免疫分析(fluoroimmunoassay， FIA)

FIA是利用免疫反應(yīng)的高度特異性和標(biāo)記示蹤物的高度靈敏性相結(jié)合而建立的一類非放射性的新興檢測(cè)技術(shù)。近年來以其特出的優(yōu)點(diǎn)逐漸為人們所重視。郭艷宏等采用反相微乳技術(shù)合成了熒光稀土銪二氧化硅納米顆粒，用其與CAP單克隆抗體結(jié)合制備CAPs殘留物免疫檢測(cè)探針，對(duì)牛奶中CAP及其琥珀酸鹽同步檢測(cè)，簡便快速，30min內(nèi)得出結(jié)果。與TAP、慶大霉素、磺胺二甲基嘧啶之間無交叉反應(yīng)，特異性好，未發(fā)現(xiàn)非特異性吸附問題。Li等利用單克隆抗體建立了時(shí)間分辨-熒光免疫分析(TR-FIA)方法檢測(cè)水產(chǎn)品中的CAP。方法LOD為0.04ng/g，LOQ為0.15ng/g；批內(nèi)CV小于10%，批間CV小于13.3%；平均回收率在83.7%～109.6%之間，CV為8.3%～1.5%；與ELISA方法相比具有很好的相關(guān)性。Zhang等采用Eu3+標(biāo)記抗CAP單克隆抗體，開發(fā)了一種新型的雙標(biāo)記TR-FIA方法檢測(cè)豬組織中的CAP。方法LOD為0.06ng/g，在添加濃度0.1～5ng/g范圍，豬肉中的回收率為102%～121%。分析結(jié)果與ELISA和GC-MS方法的相關(guān)性為0.92～0.98。Gasilova等建立了一種熒光偏振免疫分析(FPIA)方法用于檢測(cè)牛奶中的CAP。選擇雙抗體和熒光素標(biāo)記抗原的最佳配對(duì)，對(duì)使用飽和硫酸銨溶液處理牛奶樣品進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)測(cè)試過程的分析特性進(jìn)行了確定。整個(gè)分析過程不超過10min，方法LOD為20ug/kg。

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