牛奶和奶粉中7種喹諾酮類藥物殘留量測定分析條件的選擇

時間：2023-03-25 02:28:47來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

牛奶和奶粉中7種喹諾酮類藥物殘留量測定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

11.2.3.7 分析條件的選擇

(1)樣品前處理方法的優化

牛奶和奶粉中含有大量的脂肪和蛋白質，傳統的提取方法容易產生乳化現象。嘗試用10%三氯乙酸：乙腈(9：1)作為提取劑，采用HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)凈化，7種喹諾酮的回收率在43%～64%之間。將1%偏磷酸：乙腈(7：3)作為提取劑，濃縮乙腈后同樣采用HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)凈化，回收率較低。結果表明，加入沉淀劑以后提取溶液容易凈化，但是回收率偏低，可能在沉淀蛋白的同時造成藥物的絡合或挾裹，造成損失。鑒于乙腈本身具有沉淀蛋白的作用，且條件較為溫和，采用乙腈及酸化乙腈作為提取劑，經過大量的試驗確定了乙腈及酸化乙腈的用量；通過結果比較，乙腈與酸化乙腈沒有顯著差異，最終確定以乙腈作為提取溶劑的實驗方案。試驗證明，提取兩次的回收率遠大于提取一次。參考GB/T20757-2006《蜂蜜中十四種喹諾酮類藥物殘留量的測定方法液相色譜法-串聯質譜法》，提取劑中加入pH=3磷酸鹽溶液，同時解決了乙腈沉淀蛋白能力較強，第二次提取時牛奶和奶粉中的固狀物不能充分在乙腈中溶解出現絮狀沉淀的問題。

固相萃取技術是比較有效的凈化手段，本方法對比了HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)、MCX60mg/3cm3(WatersOasis)、BONDELUT-SCX，500mg/3mL三種固相萃取柱的凈化效果，試驗表明三種固相萃取柱的凈化效果均良好，但HLB柱回收率略高，因此本方法選擇HLB柱作為凈化柱。由于采用HLB柱凈化，上樣液中不能含有太多的乙腈，因此需要將提取液中的乙腈蒸干。

洗脫時，做流出曲線，采用3mL5%氨水甲醇可將7種喹諾酮完全洗脫下來，所以采用4mL 5%氨水甲醇作為洗脫液。該七種藥物中達氟沙星熱穩定性差，在45℃氮吹吹干，就有將近50%的損失，濃縮一步應注意不能將其完全吹干，待洗脫液吹至約0.2mL時，利用定容液將其補至1mL。

(2)色譜條件的建立

實驗采用了0.1%乙酸-甲醇做流動相，采用梯度洗脫，在150mm×2.1mm(i.d.)，粒度5μum的C18柱上，分析物得到了有效的分離，且峰形對稱尖銳。

(3)質譜條件的優化

用蠕動泵以10uL/min注入1μg/mL的7種喹諾酮混合標準溶液來確定各化合物的最佳質譜條件，包括選擇特征離子對，優化電噴霧電壓、鞘氣、輔助氣、碰撞能量等質譜分析條件。來確定各化合物的最佳質譜條件，包括選分析物的混標液進入ESI電離源，在正、負離子掃描方式下分別對分析物進行一級全掃描質譜分析，得到分子離子峰。7種分析物在正模式下均有較高的響應，負模式下信號值很低。然后對各分子離子峰進行二級質譜分析(多反應監測MRM掃描)，得到碎片離子信息。其具體的質譜條件為：鞘氣壓力，30unit；輔助氣壓力，5unit；正離子掃描模式；電噴霧電壓，4000V；毛細管溫度，320℃；源內誘導解離電壓，10V；Q1和Q3狹縫寬度為0.4、0.7；碰撞氣為高純氬氣，碰撞氣壓力為1.5mTorr。分析物的保留時間采集窗口確定定性定量離子對及碰撞能量見表11-11。

(4)定量方式的選擇

實驗對比了外標法和內標法兩種定量方式，由于只有氘代環丙沙星和氘代恩諾沙星兩種，且采用外標法定量回收率較高，精密度較好，因此，用外標法定量。

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