液相色譜紫外檢測法測定可食動物肌肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.3.1 適用范圍

適用于牛肉、羊肉、豬肉、雞肉和兔肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定。方法檢出限：土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素均為0.005mg/kg。

12.2.3.2 方法原理

用0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine(pH=4.0±0.05)緩沖溶液提取可食動物肌肉中四環(huán)素族抗生素殘留，提取液經離心后，上清液用OasisHLB或相當的固相萃取柱和羧酸型陽離子交換柱凈化，液相色譜-紫外檢測器測定，外標法定量。

12.2.3.3 試劑和材料

甲醇、乙腈、乙酸乙酯為色譜純；磷酸氫二鈉為優(yōu)級純；檸檬酸、乙二胺四乙酸_二鈉、草酸為分析純；0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液；0.1mol/L檸檬酸溶液；Mcllvaine緩沖溶液：將1000mL 0.1mol/L檸檬酸溶液與625mL 0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液混合，必要時用NaOH或HCl調pH=4.0±0.05；0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液：甲醇+水(1+19，v/v)溶液。

土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素標準物質，純度≥95%。

標準貯備溶液：準確稱取適量的標準物質，分別用甲醇配成0.1mg/mL的標準儲備液，貯存在-18℃冰柜中。

混合標準工作溶液：根據需要稀釋成適當濃度的混合標準工作溶液，混合標準工作溶液在4℃保存3天。

OasisHLB固相萃取柱或相當者，500mg，6mL，使用前分別用5mL甲醇和10mL水預處理，保持柱體濕潤；

陽離子交換柱：羧基型，500mg，3mL，使用前用5mL乙酸乙酯預處理，保持柱體濕潤；

12.2.3.4儀器和設備

液相色譜儀：配有紫外檢測器；分析天平：感量0.1mg，0.01g；液體混勻器；固相萃取裝置；貯液器：50mL；高速冷凍離心機：最大轉速13000r/min；刻度樣品管：5mL，精度為0.1mL；真空泵：真空度應達到80kPa；振蕩器；平底燒瓶：100mL；pH計：測量精度±0.02。

12.2.3.5 樣品前處理

(1)試樣制備

從全部樣品中取出有代表性樣品約1kg，充分攪碎，混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器內。密封作為試樣，標明標記。在抽樣和制樣的操作過程中，應防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。將試樣于-18℃冷凍保存。

(2)提取

稱取6g絞碎、混勻的肉樣，精確到0.01g，置于50mL具塞離心管中，加入30mL 0.1mol/L Na2EDTA-Mllvaine緩沖溶液(pH=4)，于液體混勻器上快速混合1min，再用振蕩器振蕩10min，以4000r/min離心10min，上清液倒入另一離心管中，殘渣中再加入20mL緩沖溶液，重復提取一次，合并上清液，待凈化。

(3)凈化

將上清液倒入下接OasisHLB柱或相當者的貯液器中，上清液以≤3mL/min的流速通過Oasis或相當的固相萃取柱，待上清液完全流出后，用5mL甲醇+水洗柱，棄去全部流出液。在65kPa的負壓下，減壓抽干20min，最后用15mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液于100mL圓底燒瓶中。

按上述方法使洗脫液在減壓情況下以≤3mL/min的流速通過羥基陽離子交換柱，待洗脫液全部流出后，用5mL甲醇洗柱，棄去全部流出液。在65kPa負壓下，減壓抽干5min，再用4mL流動相洗脫，收集洗脫液于5mL樣品管中，定容至4mL，供液相色譜紫外檢測器測定。

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