河豚魚、鰻魚中土霉素、四環素、金霉素、強力霉素殘留測定

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.4.6 測定

(1)液相色譜條件

色譜柱： BEHC18， 1.7 μm，50 mm×2.1 mm (內徑)或相當者：流速： 0.4 mL/min；柱溫： 30℃；檢測波長： 350 nm；進樣量： 10μL； 流動相： A：乙腈，B： 2%甲酸溶液，梯度洗脫條件見表12-23。

表12-23 梯度洗脫條件

(2) 液相色譜測定

將混合標準工作溶液分別進樣，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中土霉素、四環素、金霉素、強力霉素的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。在上述色譜條件下，土霉素、四環素、金霉素、強力霉素的參考保留時間1.25 min，1.35 min，1.67 min， 1.77 min。土霉素、四環素、金霉素、強力霉素標準液相色譜圖見圖12-8。

圖12-8 土霉素、 四環素、金霉素、強力霉素標準物質液相色譜圖

12.2.4.7 結果 與討論

(1)提取凈化條件的優化

在本方法研究中，對比了用Oasis HLB單一固相萃取柱凈化和Oasis HLB固相萃取柱、羧酸型陽離子交換柱雙柱凈化的凈化效果。實驗發現，只用Oasis HLB固相萃取柱凈化，在1.25 min、1.64 min均有比較大的干擾峰存在，當土霉素、四環素、金霉素和強力霉素含量小于0.010 mg/kg，對檢測結果均有影響，如圖12-9所示；而采用Oasis HLB和羧酸型陽離子交換柱雙柱凈化，從1 min到2 min之間均無干擾峰，見圖12-10。因此，本方法在國際AOAC標準AOAC 995.09的基礎上，增加了羧酸型陽離子交換柱凈化步驟，改進了凈化效果，減少了基質干擾，提高了方法的準確度。因此，增加羧酸型陽離子交換柱凈化步驟是十分必要的。

圖12-9 Oasis HLB固相萃取柱凈化后樣品空白圖

圖12-10 Oasis HLB和羧酸型雙固相萃取柱凈化后樣品空白圖

(2) 流動相配比的選擇

分別使用恒配比0.01 mol/L草酸+乙腈+甲醇(7+2+1， v/v/v) 和梯度洗脫(2%甲酸+乙腈)對土霉素、四環素、金霉素、強力霉素的分離度和靈敏度進行了對比試驗。實驗發現，這兩種流動相對4種四環素族抗生素的分離效果均很好，但檢測靈敏度和保留時間存在很大差異，當使用恒配比0.01 mol/L草酸+乙腈+甲醇(7+2+1，v/v/v)作為流動相時，土霉素和四環素檢出限為0.01 mg/kg、金霉素和強力霉素檢出限為0.020 mg/kg，且檢測時間長。而使用(2%甲酸+乙腈)作為流動相梯度洗脫時土霉素、四環素、強力霉素檢出限為0.005 mg/kg，金霉素檢出限為0.01 mg/kg，靈敏度比恒配比洗脫要高1倍，且檢測時間也同時縮短。因此，本方法采用(2%甲酸+乙腈)梯度洗脫作為四環素族抗生素的流動相。

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