鎮靜劑類藥殘留分析技術——凈化方法（二）

時間：2023-03-25 00:44:52來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

鎮靜劑類藥殘留分析技術——凈化方法（二）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

2)固相萃取( solid phase extraction，SPE)

A.巴比妥類

巴比妥類藥物凈化常用的SPE柱有HLB和C18等。

Wang等分析動物和水產品可食組織中的巴比妥類等藥物，采用HLB凈化。提取液溶解在乙酸銨緩沖液-甲醇(9+1，v/v)中上樣，依次用乙酸銨緩沖液-甲醇(9+1，v/v)、正已烷、正已烷-乙酸乙酯(95+5，v/v)淋洗，最后用5 mL正已烷-乙酸乙酯(50+50，v/v)洗脫，回收率為79.6%～108%。我國檢驗檢疫行業標準SNT 2217-2008也采用類似條件凈化方法。反相SPE凈化分別采用水相和低極性有機相淋洗可充分發揮SPE柱的保留機制，凈化提取液中的極性和非極性雜質，降低質譜分析的基質效應。

Zhao等測定豬組織中3種巴比妥類藥物，乙腈提取液濃縮后用5 mL 0.1 mol/L K2HPO4(pH 7.4)溶解，過C18 SPE柱凈化，依次用5 mL正已烷和5 mL正已烷-乙酸乙酯(95+5，v/v) 淋洗，正己烷-乙酸乙酯(7+3，v/v)洗脫。LOQ在豬肝中不高于2.20 μg/kg，豬腎中不高于3.35 μg/kg；4種藥物回收率為68%～90%。陳建虎等測定血液中巴比妥、異戊巴比妥、速可眠和苯巴比妥，用酸性緩沖液提取后，過C18 SPE柱，再用5mL水清洗，氮氣吹干后，用2 mL三氯甲烷以0.5 mL/min流速洗脫，LOD為0.04～0.10μg/mL，回收率為80.3%～92.6%。戴曉欣等14測定水產品中苯巴比妥，C18 柱依次用6 mL水和6 mL體積分數為10%的乙腈溶液淋洗，用8 mL二氯甲烷洗脫，回收率在80.49%～ 102.42%之間，RSD 為1.52%～ 10.15%，LOD為10 μg/kg，LOQ為30 μg/kg。

B.苯二氮卓類

苯二氮卓類藥物的SPE凈化柱主要包括C18、HLB、Phenyl 柱等。

汪麗萍等分析豬肉中的苯二氮卓類鎮靜劑，提取物用K2HPO4溶解后，過C18固相萃取柱，依次用5 mL蒸餾水和10 mL正己烷淋洗，用正已烷-丙酮(5+5，v/v) 洗脫。艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖的回收率為60%～115%，RSD為3.8%～9.7%，LOD為10 μg/kg。Wang 等用類似C18填料特性的多壁碳納米管凈化豬肉中的地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖。研究發現多壁碳納米管填料對上述藥物吸附選擇性比C18更高，效果更好，4種藥物回收率為75%～104%，CV為1.3%～ 10%，地西泮LOD為2 ug/kg，艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖LOD為5 μg/kg。錢曉東等建立了LC-MS MS測定魚類樣品中地西泮及其代謝物分析方法。樣品用1%氨化乙酸乙酯提取，HLB凈化，用10mL水-乙腈(9+1，v/v)上樣，待樣液全部流出后，用5 mL水淋洗，抽干，10mL乙酸乙酯洗脫。方法LOQ均為1 μg/kg，回收率為82.1%～119.0%， RSD為2.2%～15.0%。于慧娟等檢測水產品中地西泮及其代謝物去甲地西泮、替馬西泮和奧沙西泮，殘留物用乙腈-水溶解，過HLB SPE柱凈化，分別用5 mL 5%甲醇-水和5mL水淋洗，再用10 mL乙酸乙酯洗脫。待測藥物的平均回收率為82.1%～ 119.0%。

Borrey等用Bond Elute Phenyl柱提取凈化尿中的15種苯二氮卓類藥物。尿液經酶水解后溶解于PBS上樣，依次用水、乙腈-水(7+3，v/v)淋洗，用甲醇洗脫，吡啶-乙酸酐衍生化后，進行GC-MS測定，各類藥物提取率達80%以上，LOD 為1.0～1.7ng/mL。

Lee等測定毛發中的苯二氮卓類藥物，甲醇提取液蒸干后用磷酸鹽緩沖液(pH6)復溶，上CLEAN SCREEN小柱凈化，依次用水、0.1 mol/L鹽酸溶液、正已烷淋洗，用二氯甲烷-異丙醇-氨水(78+20+2，v/v) 洗脫，GC-MS測定。CLEAN SCREEN以硅膠為基質的共聚物為填料，硅膠表面聚合有獨特的疏水和季胺離子交換官能團，類似于陽離子交換萃取。地西泮、勞拉西泮、去甲地西泮、奧西泮、替馬西泮的LOD為5μg/g，咪達唑侖和唑吡坦的LOD為10μg/g；LOQ為10～20μg/g，回收率71%～103%。

C.吩噻嗪類

吩噻嗪類藥物SPE凈化常用的填料有MCX、硅藻土、HLB、C18和堿性氧化鋁等。

Cheng等用MCXSPE柱凈化豬組織中氯丙嗪、異丙嗪、地西泮和甲喹酮殘留。樣品溶解在0.1mol/L hCl-乙腈(2+98，v/v)中上樣，依次用3mL 0.1mol/L hCl和2mL甲醇淋洗，用2mL氨水-甲醇(2+98，v/v)洗脫。GC-MS測定，回收率為87.6%-106.8%。研究還發現，用HLB凈化，氯丙嗪回收率過低；用C18小柱凈化，氯丙嗪和異丙嗪回收率過低；最后選擇MCX小柱。

Holland等將腎臟中賽拉嗪及其代謝物(2，6-二甲基苯胺)的氯仿提取液直接用硅藻土SPE凈化。牛腎中塞拉嗪平均回收率為78.3%，CV為9.51%；2，6-二甲基苯胺回收率為87.2%，CV為9.61%；豬腎中賽拉嗪回收率為80.8%，CV為7.33%；2，6-二甲基苯胺回收率為86.7%，CV為7.10%。

李春風等建立了水產品中包括氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、異丙嗪、甲苯噻嗪等5種吩噻嗪類藥物的殘留分析方法。用HLB柱凈化，依次用水和10mmol/L硫酸進行淋洗，用乙腈洗脫。LOQ為0.5ng/g，總體平均回收率為75.7%～87.7%，RSD為9.0%～15.2%。

路平等測定豬肝中的氯丙嗪，用C18柱對其進行凈化處理。用2mL乙腈活化，上樣后用2mL水淋洗，氨化乙酸乙酯洗脫，洗脫液氮氣吹干后，用乙酸乙酯進行復溶，測定。組織中平均回收率為76.4%～118.6%，CV為2.2%～19.9%，LOQ為0.5～2.0μg/kg。

洪月玲等用乙腈提取豬肉及蝦肉中氯丙嗪后，提取液蒸干殘留物用2mL甲醇溶解，過堿性氧化鋁柱萃取凈化，收集流出液直接測定，LOD為4ug/kg，回收率為80%～101%。

D.丁酰苯類

丁酰苯類藥物屬堿性，常用離子交換柱凈化。

Adam等測定豬肝臟中的阿扎哌酮和阿扎哌醇，乙腈提取液用氯化鈉緩沖液稀釋，過BondElut Certify陽離子交換SPE柱凈化，依次用0.1%乙酸、甲醇淋洗，用2%氨水-乙酸乙酯洗脫。方法LOD為10μg/kg，回收率分別為88.2%和91.2%。Cerkvenik-Flajs等測定豬腎中阿扎哌隆和阿扎哌醇，乙腈提取液加乙酸酸化，上MCX固相萃取柱凈化，分別用水和甲醇淋洗，用三乙胺-甲醇(5+95，v/v)洗脫。方法回收率分別為88.2%和91.2%；阿扎哌隆和阿扎哌醇的CCa分別為1.1ug/kg、1.2ug/kg；LOQ分別為5μg/kg、10μg/kg。

E.多種類

朱堅等在分析豬肉中地西泮和氯丙嗪的殘留時，乙腈提取液中加入20%氯化鈉水溶液，用0.01mol/L硫酸調節pH4.8～5.0，過HLB凈化，用15mL酸性乙腈洗脫。豬腎中地西泮的平均回收率為76.7%～93.4%，氯丙嗪的平均回收率為99.4%～101.6%；豬肉中地西泮的平均回收率為80.1%～85.2%，氯丙嗪的平均回收率為95.5%～96.4%。Delahaut等測定豬肌肉和腎臟中吩噻嗪類(氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪)、丁酰苯類(阿扎哌隆和阿扎哌醇)殘留。乙腈提取液用10%氯化鈉溶液稀釋后，過HLB柱，用0.01mol/L硫酸溶液淋洗后，用2mL乙腈洗脫凈化。方法回收率均大于83.3%。

Zhang等用氨基柱凈化，建立了動物組織中包括11種鎮靜劑(苯巴比妥、艾司唑侖、咪達唑侖、地西泮、硝西泮、癸氟奮乃靜、氯丙嗪、乙酰丙嗪、氟哌啶醇、塞拉嗪、阿扎哌醇)在內的30種藥物的殘留分析方法。豬、牛腎臟、肝臟和肌肉的乙腈提取液吹干后溶解于0.5mL甲醇中，上氨基柱凈化，不經淋洗，直接用5mL甲醇-丙酮(1+1，v/v)和5mL丙酮洗脫。豬肌肉、腎臟、肝臟中11種鎮靜藥物回收率在76.4%～118.6%之間，CV為2.2%～19.9%，LOQ為0.5～2.0μg/kg。通過比較C18、HLB和氨基柱的凈化效果，表明氨基柱更適宜。用C18、HLB凈化，氯丙嗪、氟吩噻嗪、地西泮回收率均低于10%。

Schuh等描述了一種動物性食品(如肉類和內臟)中8種獸用鎮靜劑(包括氟哌啶醇、氯丙嗪和甲苯噻嗪等)的分析方法。采用乙腈提取，正已烷脫脂，用MCXSPE柱(6mL，500mg)凈化，最后用正己烷在堿性條件下萃取，萃取液再用LC-MS/MS分析。該方法被用來測定牛和豬肝臟加標樣品中鎮靜劑殘留，LOD為0.1～0.5μg/kg，CCβ優于歐盟基準實驗室建議的10～ 50 μg/kg的檢測水平。

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