液相色譜-串聯質譜法測定牛和豬肌肉中安乃近代謝物殘留量

時間：2023-03-25 00:20:13來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

液相色譜-串聯質譜法測定牛和豬肌肉中安乃近代謝物殘留量

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

14.2.1.1 適用范圍

適用于牛和豬肌肉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-氨基安替比林殘留量的液相色譜-串聯質譜測定。方法檢出限：4-甲酰氨基安替比林為1.8μg/kg；4-氨基安替比林和4-甲基氨基安替比林為1.5 ug/kg；4-乙酰氨基安替比林為1.0ug/kg。

14.2.1.2 方法原理

肌肉中安乃近代謝物殘留用硫酸鈉溶液(pH=7)提取，過濾后，經Bond Elut C18固相萃取柱或相當者凈化后，用甲醇洗脫，氮氣吹干。殘渣用甲醇+水溶解，供液相色譜-串聯質譜儀測定，內標法或外標法定量。

14.2.1.3 試劑和材料

甲醇、乙腈、醋酸銨：色譜純；硫酸鈉、亞硫酸鈉：分析純。

硫酸鈉+亞硫酸鈉提取溶液：準確稱取14.20g無水硫酸鈉和2.52g亞硫酸鈉，用水溶解，并使其體積達到約950mL，然后用0.5mol/L的稀硫酸調節溶液的pH至7.0，用水定容至1000mL；淋洗液：甲醇+水(1+19，v/v)；樣品定容液：甲醇+水(1+9，v/v)。

4-甲基氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林標準物質：純度≥99%。

內標標準物質：4-異丙基氨基安替比林，純度≥99%。

標準儲備溶液：100mg/L。準確稱取適量的各種安乃近代謝物標準物質，用甲醇配制成濃度為100 mg/L的標準儲備溶液，避光-18℃保存，可使用3個月。

混合標準儲備溶液：1.0mg/L。吸取每種適量標準儲備溶液，用甲醇稀釋成1.0mg/L的混合標準工作溶液，避光-18℃保存，可使用1個月。

內標儲備溶液：準確稱取適量的內標標準物質用甲醇配制成濃度為100mg/L標準儲備溶液，遇光-18℃保存，可使用3個月。

混合標準儲備溶液：1.0mg/L。吸取每種適量標準儲備溶液，用甲醇稀釋成1.0mg/L的混合標準工作溶液，避光-18℃保存，可使用1個月。

內標儲備溶液：準確稱取適量的內標標準物質用甲醇配制成濃度為100 mg/L標準儲備溶液，避光-18℃保存，可使用3個月。

內標工作溶液：0.20mg/L。吸取適量的內標儲備溶液，用甲醇稀釋成0.20mg/mL的內標標準工作溶液，避光-18℃保存，可使用1個月。

基質混合標準工作溶液：吸取適量的混合標準儲備溶液和適量內標工作溶液，用空白樣品提取液配成濃度為1.0μg/L、5.0μg/L、10.0ug/L、20.0μg/L、40.0ug/L和內標濃度為0.20mg/L的基質混合標準工作溶液。當天配制。

Bond Elut C18固相萃取柱或相當者：500mg，3mL。用前分別用5mL甲醇和5mL水處理，保持柱體濕潤。

14.2.1.4儀器和設備

液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)；固相萃取裝置；氮氣濃縮儀；旋渦混勻器；分析天平：感量0.1mg和0.01g；真空泵；均質器；移液器：10～100μL和100～1000μL；聚丙烯離心管：50mL，具塞；pH計：測量精度±0.02；低溫離心機：可制冷到4℃；玻璃離心管：15mL。

14.2.1.5樣品前處理

(1)試樣制備

取有代表性的牛或豬肌肉組織，制成實驗室樣品。試樣分為兩份，置于樣品瓶中，密封，并做上標記。制備好的試樣置于-18℃冰柜中避光保存。

(2)提取

稱取5g試樣，精確至0.01g。將上述樣品置于50mL聚丙烯離心管中，加入0.25mL濃度為2.0mg/L的內標工作溶液，然后加入15mL硫酸鈉+亞硫酸鈉提取溶液，均質1min，在10℃以4000r/min離心5min。將上清液轉移到另一個干凈的50mL容量瓶中,殘渣再分別加入15mL、10mL硫酸鈉+亞硫酸鈉提取溶液提取二次，離心后，合并上清液，并用硫酸鈉+亞硫酸鈉提取溶液定容至50mL，混合均勻，然后用玻璃濾紙過濾，待凈化。

(3)凈化

取25mL提取液放入C18固相萃取柱中，以約1mL/min的流速使樣液通過固相萃取柱，待樣液全部通過后，依次用5mL水和5mL甲醇+水淋洗液淋洗固相萃取柱，棄去全部流出液，減壓抽干固相萃取柱10min。最后用5mL甲醇洗脫，洗脫液收集于15mL玻璃離心管中，置于氮氣濃縮儀上在55℃吹至近干，用樣品定容液定容至1.0mL。定容液混勻后，過0.45um濾膜，供液相色譜-串聯質譜測定。

同時取陰性樣品，按上述提取凈化步驟制備空白樣品提取液，用于配制基質混合標準工作溶液。

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