喹噁啉類藥物殘留分析技術——凈化方法（一）

時間：2023-03-25 00:06:52來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

喹噁啉類藥物殘留分析技術——凈化方法（一）

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

(2)凈化方法

喹噁啉類藥物殘留分析主要采用的凈化方法有液液分配(LLP) 和固相萃取(SPE) 方法。LLP 所需時間較長，而喹噁啉類藥物不穩定，凈化過程不易太長，所以目前最常用的方法是SPE技術。

1)液液分配(liquid liquid partition，LLP)

本類藥物原形及其脫氧代謝物，直接用有機溶劑提取后，利用藥物極性，采用溶劑對LLP凈化。Huang等測定雞血液、肌肉、肝臟、腎臟和脂肪中CYX及其代謝物BDCYX，提取液蒸干后，用乙腈-正己烷LLP脫脂，乙腈層再凈化后用HPLC測定。CYX和BDCYX的LOQ為0.025μg/g(血漿和組織)，方法回收率在73%～87%之間，日間RSD小于9.86%。Zhang等提取羊組織中CYX及其代謝物BDCYX。肌肉、肝臟、腎臟用乙酸乙酯提取，脂肪組織用乙腈提取，提取上清液蒸干，用乙腈-正已烷LLP凈化，取乙腈層蒸干用甲醇復溶后HPLC測定，CYX回收率為65%～79%，日間CV為6.7%～11.1%；BDCYX回收率為70%～92%，日間CV為4.7%～15.9%；LOD為15μg/kg，LOQ為25μg/kg。

QCA和MQCA與組織結合，需要解離后提取，而解離方法決定了后續的凈化步驟；另外，QCA和MQCA呈酸性，在酸性溶液中以分子狀態存在，在堿性溶液中以離子態存在，這成為開發LLP方法的基礎。

堿性水解后的凈化過程往往涉及多次LLP，較為復雜。Hutchinson等分析豬肝中的QCA，堿性水解液用濃鹽酸中和后，用乙酸乙酯提取，提取液用0.1mol/L磷酸鈉(pH8.0)LLP反萃取，經SCX SPE柱凈化后，吹去氫氧化鈉-甲醇洗脫液中的甲醇，用鹽酸中和，再與乙酸乙酯LLP凈化，乙酸乙酯層吹干復溶后，用LC-MS/MS測定。方法回收率為89%～111%，CV為0.15%～10%，CCa 和CCβ分別為0.16 μg/kg和0.27 μg/kg。Huang等測定雞組織中CYX的代謝物QCA殘留，樣品經堿性水解，水解液用濃鹽酸調節pH<1后，用乙酸乙酯提取，提取液再與0.5 mol/L檸檬酸緩沖液(pH8) LLP反萃取，進一步用離子排阻色譜柱凈化，甲醇-水洗脫液用鹽酸酸化后，再與氯仿LLP，蒸干氯仿層，用流動相溶解后，HPLC分析。雞組織中QCA的LOQ為0.025 mg/kg(內臟組織)和0.02 mg/kg(肌肉)，回收率為70%～78%，CV為7.69%～11.43%。用同樣的方法，Huang等提取和凈化豬和雞組織中QCT的代謝物MQCA，樣品的堿性水解液用濃鹽酸調節pH<1后，用乙酸乙酯提取，提取液再與水LLP，棄去水相，乙酸乙酯層再用0.5 mol/L檸檬酸緩沖液(pH8)反萃取，反萃取液經離子排阻色譜凈化后HPLC測定，LOQ為0.05 mg/kg，LOD為0.025 mg/kg，回收率為74%～84%，CV為4.5%～10.8%。

酸性水解提取液在多數情況下直接經LLP轉移至有機溶劑中，再進一步處理。Della等采用偏磷酸-甲醇-水(2+20+78，v/v)水解豬肝臟中QCA，水解液用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯提取液再用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7)LLP反萃取，水相再經SPE凈化后，GC-MS測定。方法回收率為90%～102%，CV為1.7%～8.4%，CCa和CCβ分別為32μg/kg和34μg/kg，LOD為0.2μg/kg，LOQ為0.7μg/kg。

Wu等采用5%偏磷酸-10%甲醇溶液水解提取豬肝臟中的QCA和MQCA，水解液用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯用0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(用磷酸調節pH7.0)LLP反萃取，磷酸鹽緩沖液再用正己烷LLP脫脂，脫脂后磷酸鹽緩沖液經SPE凈化后測定?；厥章蕿?0%～110%，CV小于20%。實驗發現，磷酸二氫鉀緩沖液濃度從0.01～1.0mol/L(用磷酸調節pH7.0)均能達到滿意回收率，但是0.01mol/L濃度萃取后雜質含量最少。Sniegocki等測定豬肉中CBX代謝物(脫氧卡巴氧、QCA)和OLQ代謝物(MQCA)。樣品用含偏磷酸的甲醇水解后，再用乙酸乙酯-二氯甲烷(50+50，v/v)LLP凈化提取，蒸干提取物后用含0.5%異丙醇的1%乙酸溶解，LC-MSMS測定。CCa為1.04～2.11ug/kg，CCβ為1.46～2.89μg/kg，回收率在99.8%～101.2%之間。

酶解一般在弱堿性條件下進行，酶解液往往加入酸性溶液提取并脫蛋白，酸性提取液經LLP轉入有機溶劑中，然后再進一步處理。Hutchinson等測定豬肝中MQCA和QCA殘留，蛋白酶解液放置室溫后加入1mL濃鹽酸酸化提取，提取液與乙酸乙酯LLP，乙酸乙酯萃取液再用0.1mol/L磷酸鈉緩沖液(pH8.0)LLP反萃取，進一步SPE凈化后，LC-MS/MS測定QCA的CC。和CCβ分別為0.4μg/kg和1.2ug/kg，MQCA分別為0.7μg/kg和3.6μg/kg。劉正才等(4用蛋白酶酶解魚、蝦、豬肉、雞肉、牛肉、豬肝中OLQ代謝殘留標識物MQCA。酶解液冷至常溫后，加入0.3mol/LHCI溶液振蕩提取，上清液加入正己烷LLP脫脂，下層水相再用SPE凈化后，HPLC測定。MQCA平均回收率在60.7%～107%之間，RSD在4.59%～14.9%之間；6種樣品的LOQ為0.3～0.5μg/kg。

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