糖苷醇類代謝試驗

[db:作者] / 2022-11-28 00:00

不同種類微生物的代謝途徑及代謝產物不同，可利用一些生化反應來測定這些代謝產物，生化反應常用來鑒別一些在形態和其他方面不易區別的微生物，微生物生化鑒定是微生物分類鑒定中的重要依據之一，目前，多采用商品化的成套生化試劑盒來完成生化鑒定試驗，所以本書只著重介紹各類生化反應的原理，試驗方法若與試劑盒方法存在差異，以試劑盒方法為準，如需了解試劑配制請參見相關國家標準。

糖苷醇類代謝試驗

1.三糖鐵(TSI)瓊脂試驗不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異，或能利用或不能利用，能利用者，或產氣或不產氣。可用指示劑及發酵管檢驗。

試驗方法：以接種針挑取待測菌涂布于斜面并穿刺接種，置(36±1)℃培養18～24h，觀察結果見彩圖1。

本試驗可同時觀察乳糖、葡萄糖和蔗糖發酵產酸或產酸產氣，產生硫化氫(變黑)。葡萄糖被分解產酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養基中含氮物質，生成堿性產物，故使斜面后來又變紅色，底部由于是在厭氧狀態下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。

2.鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)試驗 ONPG是乳糖的結構類似物，無色的ONPG經β-半乳糖苷酶水解后生成黃色的鄰位硝基酚。迅速或遲緩分解乳糖的細菌如埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬等為陽性。而不發酵乳糖的細菌如沙門氏菌、變形桿菌等均為陰性。

3.V-P試驗 某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養基中能分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環境下，被空氣中的氧氣氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V-P(+)反應。

試驗方法：

(1)OMeara氏法。將試驗菌接種于通用培養基，于(36±1)℃培養48h，培養液1mL加OMeara試劑(加有0.3%肌酸或肌酸酐的40%氫氧化鈉水溶液)1mL，搖動試管1～2min，靜置于室溫或(36±1)℃恒溫箱，若4h內不呈現紅色，即判定為陰性。亦有主張在48～50℃水浴放置2h后判定結果者。

(2)Barritt氏法。將試驗菌接種于通用培養基，于(36±1)℃培養4d，培養液2.5mL先加入a-萘酚純酒精溶液0.6mL，再加40%氫氧化鉀水溶液0.2mL，搖動2～5min，陽性菌通常立即呈現紅色，若無紅色出現，靜置于室溫或(36±1)℃恒溫箱，如2h內仍不顯現紅色，可判定為陰性。

(3)快速法。將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中，挑取產酸反應的三糖鐵瓊脂斜面培養物一接種環，乳化接種于其中，加入5% a-萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動后放置5min，判定結果。不產酸的培養物不能使用。

本試驗一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽孢桿菌和葡萄球菌和其他細菌時，通用培養基中的磷酸鹽會阻礙乙酰甲基醇的產生，故應省去，或以氯化鈉代替。

4.甲基紅試驗(MR) 腸桿菌科各屬細菌都能發酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等各種酸性產物，可使培養基pH下降至4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。

試驗方法：挑取新鮮純培養物少許，接種于MR-VP培養基，于(36±1)℃或30℃(以30℃較好)培養3～5d，從第二天起，每日取培養液1mL，加甲基紅指示劑1～2滴，陽性呈鮮紅色，弱陽性呈淡紅色，陰性為黃色，見彩圖2。發現陽性或至第五天仍為陰性，即可判定結果。

甲基紅為酸性指示劑，pH范圍為4.4～6.0，其pK值為5.0。故在pH5.0以下，隨酸度增強而增強紅色，在pH5.0以上，則隨堿度增強而增強黃色，在pH5.0或上下接近時，可能變色不夠明顯，此時應延長培養時間，重復試驗。

5.七葉苷水解試驗 某些細菌能水解七葉苷生成七葉素與培養基中枸櫞酸鐵的亞鐵離子起反應，生成黑色的化合物，使培養基變黑。例如，克雷伯菌屬、腸桿菌屬和沙雷菌屬、單增李斯特能水解七葉苷，腸球菌屬和D群鏈球菌也能水解七葉苷，并耐受膽汁。

文章來源：《農產品質量安全檢測》

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