牛奶和奶粉中9種青霉素殘留量的測定——分析條件的選擇

時間：2023-03-25 06:45:41來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

牛奶和奶粉中9種青霉素殘留量的測定——分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

5.2.2.7分析條件的選擇

(1)沉淀劑的選擇

在本方法的研究中,根據(jù)牛奶和奶粉中蛋白質(zhì)含量高的特點(diǎn),首先要選擇合適的沉淀劑去除蛋白，從而減小或去除對測定的干擾。分別用乙腈、三氯乙酸、烏酸鈉、復(fù)合沉淀劑1：Carrez I (0.36mol/L K4Fe(CN)6·3H2O)和CarrezII (1.04mol/L ZnSO4·7H2O)、復(fù)合沉淀劑2：(1.5%五磺基水楊酸、85%甲醇和25%蒸餾水)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用三氯乙酸、烏酸鈉和復(fù)合沉淀劑 2 的沉淀效果不好，溶液渾濁，離心也不能使其澄清，對測定的干擾比較大。用乙腈、復(fù)合沉淀劑1(各150μL)的沉淀效果好，離心后的上清液非常澄清，但無論是用乙腈、甲醇、磷酸鹽緩沖液以及乙腈-水的混合液做提取液，9種青霉素的回收率普遍較低，尤其是阿莫西林和安芐西林回收率均低于50%。所以實(shí)驗(yàn)選擇用乙腈來沉淀蛋白。

(2)提取液的選擇

分別用磷酸二氫鈉溶液、用不同體積比乙腈～磷酸二氫鈉溶液(0.05mol/L，pH8.5)(5+2，v/v)、乙腈、用不同體積比的乙腈-水作為提取液，做添加回收率試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用磷酸二氫鈉緩沖液作為提取液不能沉淀蛋白，過固相萃取柱比較困難。用不同體積比乙腈-磷酸二氫鈉溶液(0.05mol/L，pH8.5)做提取液時，9種青霉素的回收率均不高。用乙腈做提取劑時，阿莫西林和氨芐西林回收率較低。用不同體積比乙腈-水做提取劑時，發(fā)現(xiàn)乙腈體積比大，易于青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、雙氯西林提取，而阿莫西林和氨芐西林較低，而水的體積比大利于阿莫西林和氨芐西林的提取，對氯唑西林、萘夫西林、雙氯西林提取率較低。所以配制不同比例的乙腈-水溶液作為提取劑，乙腈-水的比例為1：1.2：1.3：1、4：1、5：1。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙腈-水比例為3：1時，9種青霉素的回收率均較高，且蛋白沉淀較好，所以實(shí)驗(yàn)選擇乙腈-水(3+1，v/v)作為提取劑。

(3)固相萃取柱的選擇

在本方法的實(shí)驗(yàn)過程中，先后使用了BUNDELUT C18固相萃取柱(3cm3和6cm3)、OasisHLB固相萃取柱(3cm3和6cm3)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)C18柱兩種規(guī)格對阿莫西林的保留均不完全，OasisHLB固相萃取柱(3cm3和6cm3)對9種青霉素的保留較好，3cm3 HLB柱過柱較慢，流速不好控制。6cm3 HLB固相萃取柱的凈化效果最好，柱體不容易堵塞，回收率穩(wěn)定，故選擇6cm3 HLB固相萃取柱為凈化柱。在洗脫劑的選擇上，3mL乙腈能將其完全洗脫，但許多雜質(zhì)也被淋洗下來。實(shí)驗(yàn)了不同比例的乙腈-水溶液作洗脫液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)已腈-水(1+1，v/v)4mL便能將9種青霉素完全淋洗下來(如圖5-5所示)，這樣降低了洗脫強(qiáng)度，減少了洗脫液中的雜質(zhì)，降低了對分析物測定的干擾。

圖5-59 種青霉素的洗脫曲線

(4)液相色譜分析柱的選擇

實(shí)驗(yàn)采用了0.1%乙酸-乙腈做流動相，采用時間梯度洗脫，在150 mm×2.1 mm (i.d.), 填料顆粒直徑4.6 um的苯基柱分離待測組分，分析物在最大程度上得到了分離，且峰對稱尖銳，加之質(zhì)譜的高選擇性，通過MRM色譜圖能夠較好的定性定量9種分析物，無內(nèi)源干擾物影響組分的測定。

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