大環內酯類和林可胺類藥物殘留測定方法——高效液相色譜法

時間：2023-03-25 05:44:20來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

大環內酯類和林可胺類藥物殘留測定方法——高效液相色譜法

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

(5)高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)

HPLC可分析沸點在500℃以上、大分子、強極性和熱穩定性差的化合物，在獸藥殘留分析中得以廣泛應用。MALs和林可胺類藥物常用的檢測器有紫外檢測器(ultravioletdetector，UVD)和二極管陣列檢測器(diode-arraydetector，DAD；photo-diodearraydetector，PDA)，也有采用電化學檢測：器(electrochemicaldetector，ECD)和熒光檢測器(fluorescencedetector，FLD)的報道。

1)UVD、DAD/PDA檢測

Prats等建立了不同動物組織中的泰樂菌素殘留量的HPLC法。該方法應用氯仿或乙酸乙酯在堿性的條件下提取肌肉、肝臟、腎臟和脂肪組織中的泰樂菌素，使用C18反相色譜柱進行分離，乙腈-水(含0.04mol/L的磷酸氫二鈉，pH2.4)為流動相，最后用UVD進行檢測。在50～500μg/kg的添加濃度范圍內線性良好，LOQ可達到50ppb。孔科等將肉雞中的肌肉、肝臟、腎臟和脂肪組織制備勻漿后，用乙腈、石油醚和二氯甲烷液液分配凈化泰樂菌素，濃縮后用乙腈定容，以乙腈-甲醇-0.005mol/L磷酸二氫銨溶液(60+30+10，v/v)為流動相，HPLC分離，UVD進行檢測。樣品前處理最終溶液中的泰樂菌素LOD為0.05mg/L，在肌肉、脂肪、肝臟和腎臟組織中的LOD均為0.10mg/L，標準曲線的線性范圍為0.10～6.40mg/L。張永創建立了豬肉中替米考星殘留量的檢測方法。以乙腈、水、四氫呋喃為流動相，HPLC-DAD在波長290nm檢測，進樣量為100μL。方法LOD為0.01ug/g，LOQ為0.02ug/g。劉曄等測定豬肝中的MALs，樣品經甲醇提取后，用scx固相萃取柱進行凈化，再以0.025mol/L磷酸緩沖液-乙腈(pH2.5)為流動相，在C18分離柱上梯度洗脫，HPLC-DAD檢測，方法LOD為0.01～0.037μg/mL，在0.2～20μg/mL范圍內峰面積與質量濃度成良好線性關系，相關系數大于0.998。王斌、李存、王雪敏等44461分別建立了動物(牛、豬、雞)肺臟、豬組織、羊組織中替米考星殘留量的HPLC檢測方法。樣品用乙腈提取，Ci8固相萃取柱凈化，UVD在290nm波長測定。方法LOD為0.01mg/kg，LOQ為0.04mg/kg；在0.04mg/kg、0.1mg/kg、1.0mg/kg、10.0mg/kg；添加水平，方法平均回收率在76.8%～94.1%之間，CV在2.7%～8.6%之間。楊方等利用HPLC法同時檢測水產品中螺旋霉素和泰樂菌素藥物殘留。以乙腈和pH2.5磷酸緩沖溶液的混合液作流動相，在MeckPurospherSTAR RP18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱上梯度洗脫、分離，在232nm、287nm分別對螺旋霉素及泰樂菌素進行紫外檢測。方法平均回收率為82.2%～89.0%，RSD為6.24%～9.83%。劉永濤、蘇秀華等148.49)建立了檢測水產品肌肉組織中螺旋霉素、替米考星、泰樂菌素、北里霉素的UPLC檢測方法。以乙腈-25mmol/L磷酸二氫銨(pH2.5，含10%乙腈)為流動相，ACQUITYUPLCBEH C18色譜柱分離，UVD(232nm-螺旋霉素，287nm-泰樂菌素)測定。方法平均回收率為70%～102%，RSD為2.9%～11.2%，螺旋霉素、替米考星、泰樂菌素和北里霉素的LOD分別為25μg/kg、25ug/kg、50ug/kg、75ug/kg。

吳寧鵬等建立了牛奶中替米考星殘留量的檢測方法。樣品經乙腈提取，C18柱凈化處理，290nm波長下進行HPLC測定。在添加濃度0.025μg/mL、0.05ug/mL、0.10μg/mL水平，方法的平均回收率在72.1%～85.8%之間，日內CV在7.0%～10.7%之間，日間CV在3.5%～5.4%之間，LOD為0.005μg/mL。Garcia-Mayor等建立了羊奶中MALs殘留的HPLC-DAD檢測方法。樣品經氫氧化鈉和乙酸乙酯去除蛋白后，用堿水解除脂，HPLC-DAD測定。方法的回收率為55%～77%，RSD為1%～6.5%。王海濤等建立了牛奶中替米考星、泰樂菌素和螺旋霉素殘留量的HPLC同時檢測方法。以甲醇為提取液，SCX固相萃取柱凈化，0.05moL/L磷酸二氫鈉溶液-乙腈為流動相，在ORBAXEclipseXDB C18 (5um，150mm×4.6mm id)反相色譜柱.上進行分離，梯度洗脫，流速1mL/min，用DAD檢測。替米考星、泰樂菌索和螺旋霉素的LOD分別為30μg/kg、20μg/kg、40μg/kg，線性范圍為20～800ug/kg，平均回收率為88.8%～99.4%，RSD為2.2%～8.9%。

趙明建立了蜂蜜中林可霉素殘留的HPLC檢測方法。樣品經提取、凈化、反相HPLC分離后，用DAD進行檢測。流動相為硼砂緩沖液(pH5.0)-甲醇-乙腈(70+26+4，v/v)，流速為1.0mL/min，進樣量為20uL，檢測波長為204nm。在1.0～20μg/mL范圍內，線性關系良好，方法LOD為75ng/g，平均回收率為93.02%，日內CV小于1.58%，日間CV小于1.49%。

2)ECD檢測

Hanada等建立了鼠肝臟中紅霉素檢測的HPLC-ECD檢測方法。氧化紅霉素的檢測池電勢為+1100mV，線性范圍為0.5～100.0μg/g，而后應用于臨床靜脈給藥后的濃度測定，完全符合紅霉素在小動物藥動學研究中的特點，因此該方法是可靠的。Luo等建立了反相HPLC用于魚組織中林可霉素殘留的檢測方法。組織樣品用磷酸二氫鉀緩沖液(pH4.5)進行提取，C18柱凈化，50%乙腈進行洗脫，再使用乙酸乙酯進行提取，最后用離子對HPLC-ECD檢測。魚肉的LOD可以達到7ng/g，LOQ可以達到17ng/g；魚皮的LOD可以達到12ng/g，LOQ可以達到24ng/g。

3)FLD檢測

于慧娟等采用HPLC-FLD技術建立了對蝦中紅霉素殘留量的測定方法。以乙腈為提取溶劑，40mg/mL的NaCl水溶液溶解殘渣，正己烷去脂、二氯甲烷反萃取，再向乙腈溶液中加入100uL 0.1moL的KH2PO4(pH7.5)和100uL 2.5mg/mL的衍生試劑(FMOC-CL)，于40℃衍生化反應1h，HPLC-FLD測定，激發波長255nm，發射波長315nm。方法LOD為150ug/kg，回收率在75%以上。汪金菊建立了雞體內阿奇霉素及消除規律研究的HPLC-FLD方法。試驗樣品(血漿、肌肉、肝臟)經過氫氧化鈉堿化后，用正已烷提取凈化，吸取適量有機層45℃氮氣吹干，再加入衍生試劑9-芴基氯甲酸酯和硼酸鹽緩沖液置于50℃水浴鍋中衍生40min，最后加入甘氨酸作為終止液，上機檢測。試驗采用AgilentC18柱(4.6mm×250mm)作為分離色譜柱，選擇0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(含0.2%三乙胺)-乙腈(29+71，v/v，pH5.8)混合液為流動相，激發波長為265nm，發射波長為315nm，流速1.2mL/min，柱溫35℃，進樣量為20uL。測得血漿中阿奇霉素LOD為0.02μg/mL，肌肉和肝臟為0.03ug/g，LOQ三者均為0.04μg/mL，標準曲線的線性范圍為0.04～5μg/mL。

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