非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——凈化（三）

時間：2023-03-25 03:38:32來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——凈化（三）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

6)基質固相分散(matrix solid-phase dispersion，MSPD)

MSPD是將樣品與填料一起混合研磨，使樣品均勻分散于固定相顆粒表面，制成半固態后裝柱，然后根據“相似相溶”原理選擇合適的洗脫劑洗脫。該技術濃縮了傳統樣品前處理中勻漿、組織細胞裂解、提取、凈化等多個過程，避免了待測物在這些過程中的損失，提取凈化效率高、耗時短、節省溶劑、樣品用量少，但研磨的粒度大小和填裝技術的差別會使淋洗曲線有所差異，不易標準化。

A.二苯乙烯類

尹怡等建立了MSPD-GC-MS法測定水產品中DES殘留量，并對MSPD與SPE的凈化效果進行了比較。稱取5g已絞碎混勻的肌肉于50mL具塞離心管中，加入5g Florisil與20mL乙酸乙酯，渦動混合2min，4500r/min離心5min，將上清液轉移至100mL梨形瓶中，在剩余樣品中繼續加入15mL乙酸乙酯，重復上述操作，合并上清液，于40℃旋轉蒸發至干，分2次加入10mL乙酸乙酯溶解殘留物，并轉移至50mL離心管中，加入5g的Florisil，渦動混合2min，4500r/min離心5min，上清液氮氣吹干，衍生化，GC-MS檢測。該方法回收率大于90%，LOD為0.3μg/kg，與SPE法相比，MSPD法更靈敏、簡便、省時以及節省溶劑。

丁雅韻等采用MSPD和SPE結合的方法提取并凈化動物肝臟中的DES。稱取0.5g勻漿后的樣品于玻璃研缽中，加入2g左右的C18填料(用30mL的乙酸乙酯、正己烷淋洗后風干)，用研杵輕輕研磨使其混合均勻，在通風櫥中自然風干1h，均勻裝入10mL注射器簡，用注射器活塞輕壓到3.5mL左右。用8mL正已烷分兩次洗滌玻璃研缽和研杵，并將洗滌液淋洗柱子，棄去淋洗液；再用8mL乙酸乙酯分兩次洗滌玻璃研缽和研杵，并用洗滌液洗脫柱子，收集乙酸乙酯洗脫液。氮氣吹干后，SPE進一步凈化，經衍生化后，用毛細管GC-MS檢測。該方法LOD低于1μg/kg，不同DES添加量的回收率為81.6%～100.9%，CV為8.7%～13.2%。

劉宏程等采用MSPD法提取和凈化牛奶中的DES、HES和DIS。比較了3種填料C18、Florisil和N-丙基乙二胺(PSA)對牛奶中DES、HES和DIS的凈化效果。C18凈化效果差，蛋白等共萃物多；Florisil對3種雌激素吸附能力弱，脫蛋白凈化效果中等，共萃物多，選擇性差；而PSA對弱酸性的雌激素有離子作用吸附力。結果表明，PSA凈化效果最好。操作步驟為:稱取1g均質樣品于研缽中，用稀氨水調pH8.5，加1g PSA填料，在通風櫥中放置30min，揮干水分，充分研磨，均勻裝入底部墊上濾紙的10mL注射器，上層再墊一片濾紙，并把填料輕輕壓緊。用5mL二氯甲烷～甲醇(97+3，v/v)沖洗，再用5mL二氯甲烷甲醇(80+20，v/v)洗脫，洗脫液用氮氣吹至近干，流動相溶解定容至0.25mL，經0.45um濾膜過濾后，HPLC檢測g該有法平均回收率為84.1%～93.5%，RSD為3.5%～7.8%；DES、HES和DIS的LOD分別為0.004mg/kg、0.004mg/kg和0.006mg/kg，LOQ分別為0.01mg/kg、0.01mg/kg和0.02mg/kg。

Li等采用MSPD提取凈化奶和肉中的6種雌激素(包括DIS)。以C18和Florisil為混合填料，乙腈洗脫后，LC-MS/MS測定。該方法LOD為0.11～0.81ug/L，LOQ為0.61～2.20ug/L；回收率在59.6%～128.5%之間，RSD為1.2%～8.0%。

B.RALs

Lagana等采用MSPD方法提取和凈化魚組織中的ZON、a-ZOL和β-ZOL，方法分別以反相(C18)和正相(中性氧化鋁)填料作為基質分散劑，GCB柱進一步凈化，LC-MS/MS檢測。結果，在100ng/g的添加水平，C18為填料的回收率為83%～103%，CV低于11%；中性氧化鋁為填料的回收率為67%，CV低于18%，LOD為0.1～1.0ng/g。該作者又優化了C18 MSPD方法，取勻漿的肌肉和肝臟組織0.50g放置于玻璃研缽中，再加入C18填料2.0g，充分研磨、混合，肉醬可以干燥或成粉狀，將混合物加到底部有濾板的聚四氟乙烯柱中，15mL甲醇-水(7+3，v/v)、10mL水、10mL酸化甲醇(10mmol/L甲酸)和3mL甲醇洗滌，15mL二氯甲烷-甲醇(8+2，v/v)洗脫，40℃水浴中氮氣吹干，250μL乙腈-甲醇-水(37+16+47，v/v)復溶，LC-MS/MS分析。并利用該方法研究了虹鱒魚體內中ZON的代謝情況。

7)凝膠滲透色譜(gel permeation chromatography，GPC)

GPC柱內裝有一定孔徑的填料，柱中可供分子通行的路徑有粒子間的間隙(較大)和粒子內的通孔(較小)。當樣品溶液流經色譜柱時，較大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能從粒子間的間隙通過，速率較快；而較小的分子可以進入粒子中的小孔，通過的速率要慢得多。經過一定長度的GPC柱，分子根據相對分子質量被分開，相對分子質量大的淋洗時間短，相對分子質量小的淋洗時間長，從而達到分離凈化目的。李佩佩等建立了GPC-SPE/HPLC法測定水產品中DES的分析方法。樣品經乙醚超聲提取和漩渦振蕩后以乙酸乙酯_環已烷(1+1，v/v)為流動相進行GPC凈化，再過HLB柱進一步凈化，HPLC在254nm波長下測定，外標法定量。結果顯示DES在0.02～2.0mg/L質量濃度范圍內呈良好的線性關系，線性系數(r)大于0.999；空白樣品在10.0μg/kg、50.0μg/kg、200μg/kg三個加標水平下的平均回收率為84%～93%，RSD小于6.0%；LOQ為5.0μg/kg。

8)分散固相萃取(dispersive solid phase extraction，DSPE)

DSPE是美國農業部于2003年起提出使用的一種新的樣品前處理技術。該技術的核心在于選擇對不同種類的農藥都具有良好溶解性能的乙腈作為提取劑，凈化吸附劑直接分散于待凈化的提取液中，吸附基質中的干擾成分，具有操作簡便，處理快速等優點，在多農殘分析中大量應用，目前也開始在獸殘分析中使用。

唐曉姝建立了牛奶、酸奶、雞肉、雞肝、牛肉等動物源食品中4種雌激素(包括DES)的DSPE-LC-MS/MS分析方法。樣品中加入乙腈沉淀蛋白質，用無水MgSO4去除水分，再用PSA極性吸附劑分散固相萃取凈化，LC-MS/MS測定，達到簡單、快速、低成本和高回收率的目的。在優化條件下，該方法的LOD為0.66～8.26μg/L，在三個水平下的加標回收率為75.00%～109.33%，RSD為0.24%～9.23%。Wozniak等開發了一種QuEChERS(Quick，Easy，Cheap，Rugged，Safe)方法凈化肌肉樣品中的RALs和二苯乙烯類藥物。用乙酸乙酯提取，再用硫酸鎂和醋酸鈉分離水相和有機相，有機相中加入C18、PSA和硫酸鎂作DSPE凈化后，進LC-MS/MS測定。方法回收率在83%～115%之間，室內重現性小于22%；幾種藥物的CCa和CCβ分別低于0.23μg/kg和0.39μg/kg。

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