非甾類同化激素類藥殘留量測定方法（一）

時間：2023-03-25 03:37:06來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留量測定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

9.1.4.2 測定方法

目前，國內外報道的動物源基質中非甾類同化激素的檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、毛細管電泳法(CE)、液相色譜-質譜法(LC-MS)、氣相色譜-質譜法(GC-MS)、伏安法、流動注射-化學發光檢測法(FI-CL)以及免疫分析法(IA)等。

(1)伏安法(voltammetry)

伏安法是一種電化學分析方法，根據指示電極電位與通過電解池的電流之間的關系，而獲得分析結果，包括循環伏安法(cyclic voltammetry，CV)和差示脈沖伏安掃描法(differential pulse voltammetry，DVP)等。Biryol等利用酚羥基的電化學活性，分別研究了使用CV和DVP來檢測血清中的DES含量。結果顯示，CV的檢測范圍為2×10-5～6×10-4 mol/L，DVP的檢測范圍分別為1×10-5～1×10-3 mol/L(甲醇溶液)和4×10-5～6×10-4 mol/L(乙腈溶液)。CV的LOD為1.12×10-5 mol/L，DVP的LOD分別為8.85×10-6 mol/L(甲醇溶液)和1.14×10-mol/L(乙腈溶液)。

(2)流動注射-化學發光檢測法(flow injection-chemiluminescence，FI-CL)

CLD是近年來發展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器，其原理是基于某些物質在常溫下進行化學反應，生成處于激發態勢反應中間體或反應產物，當它們從激發態返回基態時，就發射出光子。由于物質激發態的能量是來自化學反應，故叫作化學發光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當的化學發光試劑混合，引起化學反應，導致發光物質產生輻射，其光強度與該物質的濃度成正比。Zhang等報道了采用流動注射-化學發光(FI-CL)方法篩選肌肉、牛肉、羊肉和豬肉中的DES。樣品經甲醇超聲輔助提取，三氯甲烷脫脂，在硫酸溶液中用鈰(IV)-羅丹明6G化學發光體系測定。該方法的線性范圍為0.75～1.12pg/mL，回收率為93.1%～104.5%，日內和日間CV低于3.0%。

(3)毛細管電泳法(capillary electrophoresis，CE)

CE是一類以毛細管為分離通道，以高壓直流電場為驅動力的新型液相分離分析技術，具有分離度高、快速、進樣量少、有機溶劑消耗少、樣品前處理要求低，已用于多種基質中非甾類同化激素殘留的檢測。但由于CE進樣量小，也限制了其檢測靈敏度。林子俺等建立了水產品中HES、DES及DIS殘留的CE-UVD檢測法，并研究了緩沖體系的酸度、濃度、添加劑、分離電壓、進樣時間以及溫度等對組分分離的影響。雌酚類物質由于2個苯環上各有1個羥基，在堿性條件下極易電離形成帶負電荷的離子，有利于減緩遷移速率以達到分離，隨著pH的升高，毛細管內層表面的負電荷增加，電滲流加大，遷移時間相應縮短，但分離效果不顯著，當pH大于10.0時，被測組分的遷移時間逐漸增長，分離趨勢明顯。在檢測波長為200nm，分離電壓為20kV，運行緩沖液為50mmo/L硼砂-25mmol/L氫氧化鈉(pH12.3，含30%的N，N-二甲基甲酰胺)的條件下，3種目標組分在14min內達到基線分離；HES、DES與DIS的質量濃度與峰面積分別在210～120mg/L、110～100mg/L、110～100mg/L范圍內呈良好線性，相關系數(r2)分別為0.9998、0.9992、0.9994；LOD為0.3～0.9mg/L。

(4)氣相色譜法(gas chromatography，GC)

非淄類同化激素可以采用GC進行分析，但必須在GC分析之前將其衍生成揮發性的衍生物。由于操作較為繁瑣，目前采用逐漸減少。Coffin等報道了用GC檢測動物組織中的DES殘留。利用DES溶解于堿性溶液的性質，用NaOH溶液和三氯甲烷反復萃取，三氟醋酸酐作為衍生化試劑，電子捕獲檢測器(ECD)檢測。其檢測限可達2～10μg/L，回收率為70%～110%。Tirpenou等對Coffin的研究方法進行了改進。用苯溶液和NaOH溶液提取樣品中的DES，提取液經硅膠柱凈化后檢測，回收率達到81%。Barkatina等使用中等極性的HP-50毛細管柱和ECD檢測肉和肉制品中DES等藥物殘留。樣品用乙醚提取，鹽酸酸化水解，經硅膠柱分離，再用C18固相萃取柱凈化，然后經三氟醋酸酐或七氟丁酸酐衍生化，GC檢測。該方法的LOD分別為0.2mg/L和0.3mg/L，回收率為75%～80%。

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