吡唑酮類藥殘留測定——氣相色譜-質譜法

時間：2023-03-25 00:52:59來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

吡唑酮類藥殘留測定——氣相色譜-質譜法

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(5)氣相色譜-質譜法(gas chromatography-massspectrometry，GC-MS)

GC-MS可以得到質量、保留時間和強度的三維信息，實現了高通量、高效率定性與定量分析。GC-MS分析前往往需要將羥基、羰基等極性基團進行烷基化衍生后再測定。

1)氣相色譜-單四極桿質譜法(GC-MS)

Singh等建立了測定血漿和尿液中保泰松的GC-MS測定方法。樣品凈化后吹干，加雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺(BSTFA)于室溫衍生后進樣，進樣量1μL，不分流進樣，GC-MS色譜柱為毛細管柱SE-54(30m×0.25mm)，升溫程序：起始溫度150℃，以20℃/min升至280℃，維持15min，進樣口溫度250℃，電子轟擊電離(EI)，選擇離子(SIM)檢測，每個藥物檢測3個離子。方法回收率為110%～120%，CV小于5%，LOD為50ng/mL。BSTFA的優點是衍生化反應不用加熱，室溫即可進行。

Taylor等采用GC-MS確證分析馬血液中保泰松和羥布宗的HPLC測定結果。凈化吹干后的樣品中加入N-甲基-N-(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(MSTFA)和0.2mol/L三甲基氫氧化銨的甲醇溶液，立即進GC-MS分析，在程序升溫中進行柱上(on-column)甲基化衍生，生成甲基化保泰松和二甲基化羥布宗。色譜柱為SE-54毛細管柱(30m×0.25mm，0.25μm)，進樣口溫度250℃，不分流進樣70s，載氣為氦氣，壓力15psi，升溫程序：恒溫100℃，維持2min，以21℃/min升溫至320℃，維持7.5min，質譜傳輸線溫度290℃，離子源溫度175℃，全掃描檢測，掃描速度60～450amu/s血液中保泰松和羥布宗可確證LOD為4μg/mL。該方法采用在線衍生，克服了硅烷化衍生物不穩定的缺點。

Hines等建立了馬血液中保泰松的GC-MS分析方法。樣品提取物用三甲基氫氧化硫-甲醇溶液(0.2mol/L)在80℃下甲烷化衍生20min，GC-MS測定，GC色譜柱為ZebronZB5(30m×0.25mm，0.25μm)，載氣為氦氣，流速1.1mL/min，不分流進樣，進樣口溫度260℃，分流時間為1.0min，升溫程序：起始溫度90℃，維持1min，以15℃升至320℃，維持6min，質譜離子源溫度250℃，傳輸線溫度280C，離子能量70eV，EI電離源，SIM檢測。方法回收率為102%～104.2%，CV為3.2%～3.9%，LOD為53ng/mL。該方法克服了在線衍生化色譜峰形展寬問題。

Gonzalez等用GC-MS測定了馬血液和尿中保泰松和羥布宗等17種藥物。用碘甲烷和無水碳酸鉀在60℃下甲烷化衍生90min，GC-MS測定。色譜柱為硅膠交聯包被聚甲基硅氧烷(25m×0.2mmid，0.1μm)，載氣為氦氣，流速0.65mL/min，進樣口和檢測器溫度280℃，升溫程序：起始溫度100℃，以25℃/min升至200C，以15℃/min升至300℃，維持2.3min，總運行時間13min，進樣體積2μL，分流比10：1，EI離子源，SIM檢測。在兩種基質中，保泰松和羥布宗的LOD分別為25ng/mL和10ng/mL；血漿樣品的回收率為41%～51%，尿液樣品的回收率為42.9%～68%。甲基化衍生化產物可穩定保存1周，比硅烷化衍生物穩定性大大提高。

2)氣相色譜-串聯質譜法(GC-MS/MS)

與單極質譜相比，串聯質譜(MSMS)選擇性更高，可用于高基質背景下痕量目標化合物的定量。

Dowling等采用GC-MS/MS分析牛乳中保泰松等藥物的殘留量。乳樣凈化洗脫液吹干后，用七氟丁酸酐(HFAA)-六氟異丙醇(HFPOH)于60℃衍生45min，吹干后，用辛烷溶解，GC-MS/MS測定。色譜柱為SE-54/CPSil 8型，進樣口溫度275℃，進樣體積2μL，起始溫度100℃，維持1min，以10℃/min升至300℃，維持1min，運行時間22min；電子能量70eV，檢測器電壓1950V，碰撞池壓力1.5 mTorr，離子源溫度250℃，傳輸線溫度290℃，EI電離，采集正離子，串聯質譜多反應監測(MRM)模式檢測。保泰松的CCa為0.70 ng/mL，CCβ為1.19 ng/mL，回收率為105%，CV小于6.7%。技術指標符合歐盟2002/657/EC指令要求。

Engel等研究安替比林代謝途徑，應用體外肝微粒體酶于37℃孵育15 min，然后測定安替比林代謝物。孵育液用二氯甲烷提取，NORA、OHA、HMA用N- (特丁基二甲基硅) -N-甲基三氟乙酰胺(MBDSTFA)在室溫衍生，GC-MS/MS 測定。色譜柱為毛細管柱DB5 (30 m×0.25 mm， 0.25 um)，不分流進樣，進樣口溫度280℃，起始溫度80℃，維持1 min，以30℃/min升至300℃，維持15 min； EI離子源，檢測正離子，電離源溫150℃，電離能70 eV，發射電流200 μA，碰撞池氬氣氣壓160 MPa，MRM模式檢測。NORA、OHA、HMA的CV分別為19.4%、14.6%和 20.7%，回收率為80%～ 120%， LOQ均為5 ng/mL。

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