液相色譜串聯質譜法測定牛奶和奶粉中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑及其代謝物殘留量

時間：2023-03-24 23:03:24來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

液相色譜串聯質譜法測定牛奶和奶粉中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑及其代謝物殘留量

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

16.2.1.1 適用范圍

適用于牛奶和奶粉中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑及其代謝物殘留量的高效液相色譜-串聯質譜測定。方法檢出限：牛奶中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑為0.5μg/kg，羥基甲硝唑為1ug/kg，1-甲基-2-羥甲基-5-硝基咪唑為2.5μg/kg；奶粉中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑2.5μg/kg，羥基甲硝唑為5μg/kg，1-甲基-2-羥甲基-5-硝基咪唑為12.5μg/kg。

16.2.1.2 方法原理

用乙腈-乙酸乙酯提取牛奶和奶粉中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑及其代謝物殘留，陽離子固相萃取柱凈化，高效液相色譜-串聯質譜測定，內標法定量。

16.2.1.3 試劑和材料

乙腈、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、乙酸、氨水：色譜純；無水硫酸鈉，分析純：經650℃灼燒4h，置于干燥器內備用；氨水-乙腈(1+19，v/v)：量取5mL氨水，用乙腈定容至100mL。

標準品：甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑、羥基甲硝唑、1-甲基-2-羥甲基-5-硝基咪唑、氘代洛硝噠唑(RNZ-D3)、氘代羥基甲硝噠唑(MZNOH-D2)和氘代1-甲基-2-羥甲基-5-硝基咪唑(HMMNI-D3)：純度均大于等于98%。

標準儲備液：分別精確稱取適量標準品，用甲醇配制成100μg/mL的標準儲備液。

混合標準中間工作液：取標準儲備液各1mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成混合標準工作液，濃度為1μg/mL。

內標標準儲備溶液：稱取適量氘代內標標準品，用甲醇溶解成濃度為200μg/mL儲備液。

內標混合標準中間工作液：量取適量標準儲備液，用甲醇定配制成內標混合標準中間工作液，濃度為1μg/mL。

陽離子固相萃取柱：500mg，3mL，使用前依次用3mL甲醇、3mL乙酸乙酯活化。

16.2.1.4 儀器和設備

高效液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)；離心機；分析天平：感量0.1mg和0.01g；旋渦混合器；旋轉蒸發儀；氮吹儀；固相萃取裝置。

16.2.1.5 樣品前處理

(1)試樣制備

a.牛奶：取均勻樣品約250g裝入潔凈容器作為試樣，密封置4℃下保存，并標明標記。

b.奶粉：取均勻樣品約250g裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標明標記。

(2)提取

牛奶樣品稱取5g(準確至0.01g)于50mL具塞離心管中，奶粉樣品稱取1g(準確至0.01g)。并加入5mL水，往稱取好的樣品中加入25μL100ng/mL內標混合液，混勻。

在稱取好樣品離心管中首先加入5mL乙腈以沉淀蛋白，然后再加入20mL乙酸乙酯，振蕩提取2min后，3000r/min離心10min，移取上清液并通過5g無水硫酸鈉過濾至雞心瓶中。再用20mLZ酸乙酯重復提取一-次，合并上清液于同一雞心瓶中。

(3)凈化

將提取液于45℃下旋轉蒸發至約2mL左右，然后轉移到已活化的固相萃取柱上，再用5mL乙酸乙酯洗滌雞心瓶兩次，洗液一并轉移到固相萃取柱上，以小于2mL/min流速滴下。接著依次用3mL丙酮，3mL甲醇，2mL氨水-乙腈(5+95，v/v)淋洗，最后用5mL氨水-乙腈(5+95)洗脫并收集(此過程流速小于2mL/min)。洗脫液在45℃水浴上用氮氣小心吹至近干，用水定容至1mL，渦漩混合后，過0.45um濾膜供HPLC-MSMS分析。

(4)空白基質溶液的制備

將取牛奶陰性樣品5g，奶粉陰性樣品1g(精確到0.01g)，按上述提取凈化步驟操作。

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