硫脲嘧啶類藥物測定方法（三）

時間：2023-03-24 21:56:09來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

硫脲嘧啶類藥物測定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(7)毛細管電泳法(capilliary electrophoresis，CE)

CE作為一種常見的色譜方法也被應用于動物基質或飼料中硫脲嘧啶類藥物的檢測，通常配備激光介導熒光檢測器(LIFD)和電化學檢測器(ECD)等，但是，其特異性和靈敏度尚不能滿足有效監控的要求。

PerezRuiz等采用CE測定了飼料和尿液中的硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶。分析物在強堿條件下經5-IAF衍生化后，采用CE-LIFD檢測。樣品采用高壓注射(0.5psi，5s)進樣，常規電極分析，電壓12kV，電流約50mA。分離采用未涂層的熔融石英毛細管(75umi.d，375umo.d.)，長57cm(有效長度50cm)，柱溫25℃，運行緩沖液為20mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH10)。LIFD系統包括一個空氣冷卻的3mW氬離子激光(激發波長488nm)，一個陷波濾波器(488nm)和一個選擇性檢測產生熒光的帶通濾波器(520nm)。該方法線性范圍為0.1～11umol/L，回收率在75%～92%之間，RSD小于3%。Kong等采用CE-ECD建立了同時檢測飼料中5種硫脲嘧啶類藥物的分析方法。采用自制的壁射流ECD檢測器，鉑盤工作電極(300um i.d.)，檢測分析物氧化電流。在優化實驗條件下，5種藥物可在15min內，在電壓16kV下，由20mmol/L硼酸鈉緩沖液(pH9.2)有效分離。甲巰咪唑的LOD為7.6ug/kg，丙基硫脲嘧啶為25ug/kg，苯基硫脲嘧啶為15ug/kg，硫脲嘧啶為18μg/kg，甲基硫脲嘧啶為20μg/kg。

(8)氣相色譜-質譜法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

色-質聯用技術的飛速發展有力地促進了硫脲嘧啶類藥物殘留分析方法的進步。色譜技術保證硫脲嘧啶類藥物高效分離的同時，質譜技術為陽性樣品的確證提供了豐富的結構信息。衍生化后的硫脲嘧啶類藥物，GC-MS的檢測靈敏度可以降低到50ng/g以下，氣相色譜-串聯質譜法(GC-MS/MS)更可以降低到25ng/g以下。電子轟擊電離(EI)、化學電離(CI)技術均有應用。

Yu等開發了牛肉中的硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、丙基硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶的GC-MS分析方法。甲酯化衍生物進GC-MS分析，HP UItra 2毛細管柱程序升溫分離，初始爐溫70℃，保持0.5min，以10℃/min升至90℃，再以20℃/min升至280℃，保持2.5min，250℃不分流進樣，載氣為氦氣，流速1mL/min，質譜溫度280℃，EI源電力，以選擇離子模式(SIM)模式監測。該方法回收率在50%～90%之間，CV小于10%；硫脲嘧啶的LOQ為25μg/kg，其他藥物為15μg/kg。Liu等建立了動物組織中5種硫脲嘧啶類藥物的殘留分析方法。PFBBr和MSTFA衍生產物用GC-MS測定，DB-5ms毛細管柱程序升溫分離，氦氣為載氣，流速1mL/min，初始爐溫100℃，保持2min，以15℃/min升至260℃，再以10℃/min升至290℃，保持5min，250℃進樣，EI電離源，70eV電離能量，離子源溫度200℃，接口溫度250℃，SIM模式監測。組織中的平均回收率在71.5%～96.9%之間，RSD低于10%；巰基苯并咪唑的LOD為10mg/kg，苯基硫脲嘧啶為5mg/kg，硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶和丙基硫脲嘧啶為2mg/kg。Zou等建立了牛奶與尿液中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、丙基硫脲嘧啶、苯基硫脲嘧啶和甲巰咪唑的殘留分析方法。PFBBr和MSTFA衍生產物用GC-MS測定，DB-5MS毛細管柱程序升溫分離，載氣為高純氦氣，流速1mL/min，不分流進樣，進樣口溫度250℃，離子源溫度200℃，接口溫度250℃，EI電離源，70eV，SIM模式監測。5種藥物的回收率在70%以上，RSD在2.1%～7.9%之間；甲巰咪唑的LOD為0.004μg/g，其他藥物為0.0016μg/g。陳華宜等建立了GC-MS測定豬腎中硫脲嘧啶類藥物的篩選方法，不需要衍生化，直接進樣檢測。采用HP-5MS彈性石英毛細管柱分離，進樣口溫度250℃，柱溫70℃保持0.6min，以25℃/min的速度升至200℃，保持5.2min，不分流進樣，載氣為高純氦氣，柱流量1.0mL/min；質譜接口溫度280℃，EI源電子能70eV，電子倍增器電壓2094V，全掃描方式(full scan)，掃描范圍35～550分子量。結果在一份豬腎樣品中檢出了N，N-二甲基硫脲和甲巰咪唑。

Batjoens等建立了一種測定尿液中4種硫脲嘧啶類藥物的氣相色譜-離子阱質譜(GC-MSn)分析方法，即使在提取和凈化的損失較大的情況下，靈敏度仍可以達到50ppb。采用HP Ultra 2毛細管色譜柱，初始柱溫100℃，以15℃/min升到200℃，再以30℃/min升到300℃，保持3min，進樣溫度260℃，傳輸線溫度300℃，載氣為氦氣，掃描范圍80～400分子量，EI電離。MSTFA衍生化產物通過一級質譜全掃描篩查；發現可以結果時，再采用二級質譜查找子離子確證。Pensabene等也建立了組織中4種硫脲嘧啶類藥物的GC-MSn確證方法。MSTFA衍生物采用Rtx-5MS毛細管柱(30m×0.25mmid，0.25um)程序升溫分離，EI電離，二級質譜確證，確證濃度可以達到0.1μg/g。

Le Bizec等報道了甲狀腺中6種硫脲嘧啶類藥物的GC-MS分析方法。PFBBr和MSTFA衍生產物用GC-MS檢測，傳輸線溫度280℃，進樣口溫度250℃，HP-1毛細管柱程序升溫分離，氦氣為載氣，流速1mL/min，采用負化學源電離(NCI)，氨氣為反應氣，SIM模式監測，檢測限優于1ng/g，方法回收率在40%～70%之間。該研究還同時在EI電離和正化學源電離(PCI)模式下，進行了特異性分析。

(9)液相色譜-質譜法(liquid chromatography. mass spectrometry，LC-MS)

LC-MS技術，特別是液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)技術的完善，有效地促進了硫脲嘧啶類藥物殘留測定方法的進步，目前已成為硫脲嘧啶類藥物殘留分析的主要手段。常用的接口技術有大氣壓化學電離源(APCI)和電噴霧電離源(ESI)。

Blanchflower等中率先報道利用LC-MS技術測定了牛尿和甲狀腺中的5種硫脲嘧啶類藥物。Prodigy ODS3反相色譜柱(150mm×4.6mm i.d.)分離，含0.1%七氟丁酸的去離子水和55%甲醇溶液(含0.1%七氟丁酸)為流動相，梯度洗脫，流速1mL/min，采用APCI源，源溫150℃，APCI探針溫度450℃，鞘氣和干燥氣流速分別為50L/h和200L/h，SIM模式監測[M+H]+。該方法添加回收率在48.1%～95.8%之間，檢出限在25ng/g以下。

De Wasch等運用液相色譜-離子阱質譜(LC-MSn)測定了甲狀腺和肉中6種硫脲嘧啶類藥物的NBD-CI衍生物。用Symmetry C18色譜柱(5um，150mm×2.1mm)分離，甲醇和0.73%乙酸溶液為流動相，線性梯度洗脫，ESI+電離源，MSn監測二級子離子。該方法CCβ為20ng/g。

Pinel等運用LC-MS/MS技術，將牛尿中硫脲嘧啶類藥物3IBBr衍生物的檢測限降低到ng/g級別。采用Nucleosil C18AB色譜柱(5um，2.5mm×50mm)分離，甲醇-0.5%乙酸為流動相梯度洗脫，流速0.3mL/min，ESI-電離源，毛細管電壓3kV，錐孔電壓40V，源溫120℃，去溶劑溫度300℃，氮氣為霧化氣和輔助氣，流速分別為90L/h和600L/h，氬氣為碰撞氣，碰撞電壓40eV，選擇反應監測(SRM)模式檢測。方法CCa在0.1～5.2μg/L之間，CCβ在2.6～23.2μg/L之間。邱元進等建立了牛奶中甲巰咪唑、硫脲嘧啶、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巰基苯并咪唑6種硫脲嘧啶類藥物殘留的LC-MS/MS分析方法。4-碘芐溴衍生物用Luna C18色譜柱分離，乙腈和5mmol/L乙酸銨溶液(含0.2%甲酸)進行梯度洗脫，ESI、多反應監測(MRM)模式檢測，內標法定量。結果表明：牛奶中6種目標物在優化條件下分離良好，響應值高，峰形尖銳對稱，在5～100μg/kg范圍內呈良好的線性關系，相關系數廠均大于0.99；檢出限為0.14～0.32μg/kg，定量限為0.48～1.1ug/kg；10ug/kg、20μg/kg和50μg/kg添加水平的平均回收率為82.8%～113.6%，RSD為2.4%～14.3%。

Lohmus等首先報道了采用UPLC-MS/MS測定尿液和甲狀腺中甲巰咪唑、硫脲嘧啶、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巰基苯并咪唑的3IBBr衍生物的殘留分析方法。衍生后的硫脲嘧啶類藥物用Acquity UPLCTM BEHC18色譜柱(1.7μm，2.1mm×100mm)分離，水-乙腈-乙酸溶液(80+20+0.1，v/v)和水-乙腈-乙酸溶液(10+90+0.1，v/v)為流動相，梯度洗脫，流速0.5mL/min，ESI電離源，正負離子切換，SRM模式監測，內標法定量。方法CCa和CCβ均低于10μg/kg。VandenBussche等也采用UPLC-MS/MS測定尿液中的8種硫脲嘧啶類藥物。凈化后的該類藥物不用衍生，直接UPLC-MS/MS測定。用Acquity UPLCHSST3柱(1.8μm，100mm×2.1mm)分離，0.1%甲酸和含0.1%甲酸的甲醇溶液為流動相梯度洗脫，流速0.3mL/min，三重四極桿質譜分析，ESI+電離源，噴霧電壓3.5kV，霧化和毛細管溫度分別為370℃和300℃，SRM模式監測。方法線性系數在0.982～0999之間；CCa在1.1～5.5μg/L之間，CCβ在1.7～7.5ug/L之間；RSD小于15.5%。

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