磺胺類藥物殘留測定方法（一）

時間：2023-03-25 08:01:07來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

磺胺類藥物殘留測定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

隨著獸藥殘留分析技術(shù)的發(fā)展，儀器分析方法在殘留檢測領(lǐng)域的地位越來越受到重視，動物源基質(zhì)中SAs殘留分析常用儀器分析技術(shù)見表2-4。LC-MS/MS具有高效快速、靈敏高、重復(fù)性好及提供確證信息等優(yōu)點，已經(jīng)逐漸成為SAs殘留分析中最常用的方法：而免疫分析技術(shù)也已成為SAs殘留分析的研究熱點，但如何提高免疫分析法的靈敏度，避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，還有待進(jìn)一步研究。

(1)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

HPLC是SAs殘留分析的國際公認(rèn)方法，但也有一定的局限性，主要表現(xiàn)在樣品前處理步驟較多，分析時間長，不利于快速篩選，特別是在多殘留分析時，很難實現(xiàn)色譜上的完全分離，而梯度洗脫的運用，可以一次分析更多的藥物種類。隨著超高效液相色譜(ultra performance liquid chromatography，UPLC)的發(fā)展，它同時實現(xiàn)了高分離度、高靈敏度和高分析速度，目前已經(jīng)大量應(yīng)用于SAs的殘留分析。SAs是酸堿兩性藥物，其保留能力與流動相的pH、柱填料類型等有關(guān)。流動相一般為乙腈、甲醇、水，并常加入甲酸、乙酸、磷酸、磷酸鹽緩沖液以及醋酸銨等，改善色譜分離，提高靈敏度。常用的色譜柱為Cig柱和苯基柱，通過紫外檢測器(ultraviolet detector，UVD)、二極管陣列檢測器(diode-array detector，DAD；photo-diode array detector，PDA)、熒光檢測器(fluorescence detection，F(xiàn)LD)、質(zhì)譜檢測器(mass spectrometry detector，MSD)、電化學(xué)檢測器(electrochemical detector，ECD)以及化學(xué)發(fā)光檢測器(chemiluminescent detector，CLD)等進(jìn)行檢測。

1)紫外檢測器(UVD)和二極管陣列檢測器(DAD/PDA)

SAs結(jié)構(gòu)中帶有苯環(huán)，還具有較強(qiáng)的紫外吸收，紫外檢測常用的波長范圍為260-280nm。

萬春花等建立了動物組織中的15種SAs的HPLC分析方法。樣品用乙腈提取，經(jīng)正己烷LLP凈化和SPE凈化后，進(jìn)HPLC分析。采用C18色譜柱，柱溫30℃，以乙腈-0.02%磷酸為流動相，流速1.0mL/min，梯度洗脫，在268nm下測定。方法加標(biāo)回收率在80.3%～92.3%之間，靈敏度滿足殘留分析要求。Pecorelli等建立了同時測定動物肌肉中10種SAs的HPLC分析方法。勻漿后的樣品用乙酸乙酯提取，陽離子交換SPE柱凈化后，用HPLC-DAD在270nm檢測。方法按照2002/657/EC對特異性、靈敏度、準(zhǔn)確度等進(jìn)行驗證，性能指標(biāo)滿足SAs殘留分析的要求。趙海香等以MSPD和HPLC技術(shù)為基礎(chǔ)，采用低毒的乙酸乙酯為洗脫溶劑，建立了與環(huán)境友好的魚肉組織中8種SAs的多殘留快速分析法。采用C18柱分離，柱溫30℃，50mmol/L NaH2PO4-乙腈(70+30，v/v)為流動相，流速0.7mL/min，270nm紫外檢測。8種SAs被有效分離，在0.01～1.0ug/mL范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)在0.9999以上；添加回收率為76.0%～115.0%，RSD小于6.4%；儀器LOD均為0.01ug/mL，方法LOD為0.02ug/g。

Kishida等國建立了雞血漿中SMM、SDM及其N-乙酰基代謝物的HPLC分析方法。樣品用4mol/L硫酸銨溶液均質(zhì)提取，離心后用HPLC檢測。在聚乙二醇反相色譜柱上分離，0.001mol/L乙酸鈉為流動相，PDA測定。在0.1ug/mL、0.5ug/mL、1.0ug/mL添加濃度，方法回收率大于78%，RSD小于4%；LOQ優(yōu)于0.09ug/mL。Jen等建立了豬下水中SAs的殘留分析方法。樣品用乙酸乙酯提取，HPLV-UVD測定，ODS反相色譜柱分離。在0.05～10ug/mL范圍，方法線性良好(r>0.9999)，適用于豬下水中SAs的測定。Kishida等采用HPLC-PDA還檢測了雞血漿、肌肉、肝臟和雞蛋中的SMM、SDM及其NM-羥基乙酰化代謝產(chǎn)物。樣品用乙醇在手持式超聲波勻漿器中提取，以反相C4柱為分離色譜柱，乙醇-1%乙酸為流動相，梯度洗脫，PDA檢測。方法回收率大于90%，RSD小于%，LOQ優(yōu)于30ng/g。

Kishida等國還開發(fā)了原料乳中SMM、SDM及其N-乙酰基代謝物的HPLC分析方法。樣品用乙醇-乙酸(97+3，v/v)提取，Hisep屏蔽疏水相(SHP)色譜柱分離，pH3.1 0.1%乙酸-乙醇(75+25，v/v)為流動相，PDA測定。在添加濃度25～500ng/mL的回收率均大于81%，RSD小于5%；LOQ優(yōu)于25ng/mL。Tolika等開發(fā)了牛奶中SDZ、STZ、SMTH、SMZ、SMPZ、SMMX、SMXZ、SIX、SDMX、SQX等10種SAs的HPLC-PDA檢測方法。用乙酸乙酯、正己烷、異丙醇混合提取，以0.1%甲酸-乙腈-甲醇為流動相，梯度洗脫，在265nm檢測。3個添加水平下的回收率在93.9%～115.9%之間，RSD低于8.8%；CCa為101.61～106.84μg/kg，CCβ為105.64～119.01ug/kg。張麗媛等應(yīng)用以離子液體為基礎(chǔ)的均相液液微萃取技術(shù)，建立了酸奶樣品中SD、SMI、SM2和SMZ的HPLC分析法。通過加鹽和調(diào)節(jié)酸奶樣品的pH，將酸奶樣品中的蛋白質(zhì)和脂類除去。用C18色譜柱分離，柱溫35℃，流動相為0.1%甲酸乙腈溶液和pH3的0.1%甲酸，梯度洗脫，流速0.5mL/min，進(jìn)樣量20uL，檢測波長265nm。SD、SMl、SM2和SMZ的LOD分別為8.17ug/L、7.43ug/L、6.71ug/L、7.51ug/L。應(yīng)用該方法對4種酸奶樣品進(jìn)行分析，加標(biāo)回收率在95.78%～104.38%之間，RSD低于5.23%。

表2-4動物源基質(zhì)中常用的SAs殘留分析技術(shù)

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