鎮靜劑類藥殘留測定方法（二）

時間：2023-03-25 01:12:59來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

鎮靜劑類藥殘留測定方法（二）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(3)氣相色譜-質譜法( gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

1)巴比妥類

巴比妥類藥物采用GC-MS測定，既可以不衍生直接測定，也可進行甲基化反應，降低藥物極性，降低揮發溫度，減少藥物分解，并提高檢測靈敏度。

A.衍生

趙海香等建立了豬肉中巴比妥、異戊巴比妥、苯巴比安甲基化衍生GC-MS測定方法。提取液殘留物吹干后，加1mL丙酮、20μL碘甲烷和50mg無水碳酸鉀，渦動溶解，52℃甲基化衍生反應2.5h，冷至室溫，離心，取上清液用N2吹干，乙酸乙酯定容，采用HP-5毛細管柱分離，電子轟擊電離源(EI)質譜在選擇離子(SIM)模式檢測，外標法定量。3種巴比妥類藥物的添加標準曲線的線性回歸相關系數均在0.99以上，線性范圍為2.5～ 50μg/kg，回收率為65%～112%，RSD為5.14%～17.2%，LOD均為1 μg/kg。該作者還采用微波輔助衍生化方法測定了豬肝和豬腎中巴比妥、異戊巴比妥、司可巴比妥鈉和苯巴比妥。殘留物中加入衍生化試劑1 mL丙酮、150 μL碘甲烷和50 mg碳酸鉀，混合均勻密封，放入加有250 mL蒸餾水的500 mL燒杯中，置于微波爐中，低火檔加熱，衍生化8min后，取出冷卻至室溫，離心，移取有機相，N2吹干，用乙酸乙酯定容至1 mL， GC-MS測定。方法LOQ在豬肝中不高于2.20 μg/kg，豬腎中不高于3.35 μg/kg；4種藥物的加標回收率為68%～90%，RSD均不高于10%。

B.不衍生

陳建虎建立了不衍生，直接采用氣相色譜-離子阱質譜(GC-MSn)測定血液中巴比妥、異戊巴比妥、速可眠、苯巴比妥的方法。載氣為He，初始柱溫160℃(保持1 min)，以15℃/min 的升溫速率升溫至280℃(保持1 min)，進樣口溫度280C，離子阱質譜溫度為170℃，接口溫度270℃。巴比妥、苯巴比妥等均為含氮化合物，電負性強，在進行全離子掃描檢測時，形成較穩定的[M+1]+峰作為母離子，選用適當CID電壓，在二級質譜圖上清晰地得到由所選母離子產生的特征碎片離子，匹配度提高到95%以上，同常規的GC-MS檢測結果相比，GC-MSn的信/噪比(SN)大大提高了靈敏度。該方法巴比妥類藥物LOD為0.04～0.10μg/mL，回收率為80.3%～92.6%。Saka等報道了不用衍生化直接測定血漿中異戊巴比妥和苯巴比妥的GC-MS方法。由于巴比妥類藥物呈酸性，GC-MS測定吸附效應較大，使靈敏度降低，該作者在進樣液中加入3%甲酸可減少與毛細管吸附，提高靈敏度。方法線性系數大于0.9995，準確度和精密度滿足FDA要求。

2)苯二氮卓類

苯二氮卓類藥物既可以不用衍生直接GC-MS測定，也可以通過衍生化，降低藥物氣化溫度和提高檢測靈敏度。

A.不衍生

常青等建立了血漿中10種鎮靜藥(包括奧沙西泮、地西泮、硝西泮、氯硝西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖等7種苯二氮卓類藥物)的GC-MS快速定性定量分析方法。藥物不衍生直接測定，色譜柱為HP-5MS毛細管柱，為保證靈敏度，采用脈沖不分流模式進樣，根據溶劑的膨脹體積和襯管體積，實現了大體積進樣，進樣量達3μL。MS采用全掃描(SCAN)模式定性，SIM模式下采用內標法定量。所測樣品色譜分離良好，線性關系良好，藥物的回收率均在92%～11.7%之間，LOD為2～20 μg/L。Wang等用GC-MS不衍生測定豬組織中地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖殘留。檢測線性范圍為10～500ng/mL (地西泮)和20～1000ng/mL(艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖)；回收率為75%～104%，CV為1.3%～10%； LOD為2μg/kg (地西泮)和5μg/kg(艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖)。汪麗萍等建立了豬肉中地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖等4種苯二氮卓類藥物殘留的檢測方法。分析物凈化后用乙酸乙酯溶解，不衍生直接GC-MS測定。質譜采用EI、SIM模式檢測。地西泮線性范圍為5～ 100μg/L，回收率為60%～70%，RSD為7.6%～ 12.9%，LOD 為2μg/kg；艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖的線性范圍為50～1000μg/L，回收率為60%～115%，RSD為3.8%～19.7%，LOD為10μg/kg。

B.衍生

苯二氮卓類藥物GC-MS檢測常用的衍生化方法有硅烷化、烷基化和乙酰化，特別是乙酰化方法解決了硅烷化和烷基化衍生需要加熱的問題，反應試劑也易于氮氣吹干，減少了額外萃取步驟；同時，衍生化產物在幾天之內都很穩定，檢測峰形良好。

Lee等測定毛發中的苯二氮卓類殘留，提取物用N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺(MSTFA)在70℃硅烷化衍生30 min，GC-MS測定。色譜柱為HP-5MS毛細管柱(30 m， 0.25 mm i.d， 0.25 um膜厚)，進樣口溫度250℃，氦氣流速1.0 mL/min，升溫程序：起始溫度100℃，1 min；以10℃/min上升至300℃；維持15min；單極質譜，EI 離子源，SIM方式檢測。地西泮、勞拉西泮、去甲地西泮、奧西泮、替馬西泮的LOD為5 ng，咪達唑侖和唑吡坦的LOD為10ng， LOQ為10～20 ng，回收率為71%～ 103%。

汪麗萍等建立了豬肉中硝西泮、氯硝西泮殘留的GC-MS檢測方法。殘留物中加入丙酮0.5mL、碘甲烷20 μL、無水碳酸鉀20mg，在60℃下，甲基化衍生反應30 min，采用GC-MS測定，EI、 SIM模式檢測。回收率在80%左右，RSD為6.9%～14.9%，LOD 為16.7 μg/kg。實驗發現，用非衍生化GC-MS方法檢測硝西泮、氯硝西泮時，檢測靈敏度較低；同時，因其結構中所含-NH基團與色譜柱作用，降低了柱效，但通過衍生化反應可以消除影響。

Borrey等測定尿中15種苯二氮卓類藥物(包括阿普唑侖、氟硝西泮、氟西泮、凱他唑侖、勞拉西泮、三唑侖以及相應代謝物)。用吡啶-乙酸酐在室溫下乙酰化衍生20 min，再用GC-MS測定。各藥物回收率達80%以上，且衍生化產物可穩定4天；LOQ 為0.1～0.5 μg/mL，CV為1.1%～4.9%。Papoutsis等用GC-MS同時檢測了血液中的阿普唑侖、氟硝西泮、氟西泮、凱他唑侖、勞拉西泮、三唑侖及其代謝物a-羥基阿普唑侖、7-氨基-氟硝西泮、4羥基阿普唑侖、脫甲基氟硝西泮、7-氨基脫甲基氟硝西泮、羥乙基氟西泮、N-脫烴基氟胺安定和a-羥基三唑侖。提取物采用吡啶和乙酸酐作為乙酰化衍生試劑，在室溫下衍生20～30min后，為獲得最大靈敏度，采用柱頭注射法在聚二甲基硅氧烷色譜柱上分離，EI-MS測定。回收率均高于74%，CV為1.12%～4.94%；LOD和LOQ分別為0.52～58.47ng/mL和1.58～177.2ng/mL。

3)吩噻嗪類

吩噻嗪類藥物一般直接測定，不用衍生化。

鄭水慶等測定了血液中的苯海索、氯丙嗪和氯氮平。在pH>10條件下用苯-乙酸乙酯(1+1，v/v)提取，GC-MS全掃描法進行定性檢測。色譜柱為HP-5MS毛細管柱(30m×0.25mm，0.25μm)，柱溫：初溫100℃保持1 min，以20℃/min升至280℃，保持15 min；進樣口溫度260℃；載氣為氦氣，流速1.0mL/min；分流進樣，分流比20：1；質譜EI源溫度230℃，傳輸線接口溫度280℃，四極桿溫度150℃；SIM模式定量檢測；溶劑延遲8min。以地西泮-d5為內標定量，氯丙嗪LOD為0.3ng/mL，回收率為79.9%～85.5%，日內、日間精密度均小于5.1%。呂燕等I3測定了豬肝中氯丙嗪殘留。豬肝中殘留的氯丙嗪在堿性條件下經乙酸乙酯提取后，40℃水浴中旋轉蒸發至近干，乙腈-正己烷LLP脫脂，C18柱凈化，GC-MS在SIM模式下測定。方法回收率為80.2%～90.7%，RSD為5.9%～8.6%，LOD為1μg/kg。許世富(73)采用GC-MS測定了豬肝、豬肉中的氯丙嗪。用氨化乙酸乙酯提取，正己烷脫去脂肪，經C18柱凈化后，用2%氨化乙酸乙酯洗脫，GC-MS測定。采用EI電離源方式進行SIM檢測。方法LOD為1ng/g，回收率為78.2%～89.3%，RSD為4.34%～6.03%，日內CV為4.35%～5.67%，日間CV為3.97%～5.04%。

4)丁酰苯類

丁酰苯類藥物極性很小，一-般凈化后不衍生直接測定。

Adam采用GC-MS測定了豬肝中的阿扎哌隆和阿扎哌醇。色譜分離采用DB-1分析柱，初始溫度40℃，維持1 min，以30℃/min升至140℃， 6℃/min 升至190℃，維持3 min，30℃/min 升至250℃，維持12.3 min，接口傳輸線280℃，質譜在EI、SIM模式下測定。LOD為10 μg/kg。Olmos-Carmona等采用GC-MS測定尿液中丁酰苯類藥物。不衍生直接GC-MS在EI、SIM模式下測定。方法LOD分別為5μg/L (氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、阿扎哌隆、開他敏)、50 μg/L(阿扎哌醇)、20 μg/L(塞拉嗪)、50 μg/L (阿扎哌醇)和10 μg/L (氟哌啶醇)，回收率均大于70%。

5)多種類

譚貴良等研究建立了同時測定臘腸中地西泮、奧沙西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖、苯巴比妥、異丙嗪7種鎮靜劑殘留的GC-MS分析方法。試樣中的鎮靜劑類藥物經氨化乙腈和酸化乙腈提取，用C18固相萃取柱凈化，直接上GC-MS分析。采用毛細管色譜柱DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)進行分離，EI、SIM模式下測定，外標法定量(定量離子分別為256、205、259、279、313、204、72)。結果表明，7種鎮靜劑類藥物在一定的含量范圍內線性關系良好，相關系數大于0.997；LOD為0.020～0.082 mg/L；回收率為63.20%～88.23%，RSD為7.02%～16.89%。

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