咪唑駢噻唑類藥物測定方法（二）

時間：2023-03-24 22:16:36來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

咪唑駢噻唑類藥物測定方法（二）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(5)超臨界流體色譜法(supercritical fluid chromatography，SFC)

SFC是一種介于GC和HPLC之間的色譜技術。揉合了GC的高速度、高效率和HPLC的選擇性強、分離效能高等優點，是一種有力的分離和檢測手段。Perkins等建立了同時檢測豬組織中左旋咪唑等藥物的SFC和SFC-MS方法。采用氨基鍵合固定相，以二氧化碳與甲醇改性劑作為流動相，對藥物分離條件進行了摸索，結果顯示盡管使用較高比例的改性劑，左旋咪唑仍然吸附在氰基鍵合、ODS2和硅基等酸性固定相上；同時研究了改性劑特性變化的影響，發現較低比例的改性劑能使左旋咪唑.與內在的化合物及溶劑峰分離，同時也對采用傳送帶(MB)接口技術和改進后的熱噴霧(TSP)接口技術的填充柱SFC-MS法進行了研究，發現蒸發器溫度在80℃時左旋咪唑能夠產生大的響應值。

(6)氣相色譜-質譜法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

GC-MS是殘留分析中常用的確證技術。目前也有用于左旋咪唑殘留分析的報道。徐靜等建立了測定動物組織中左旋咪唑殘留的GC-MS方法。以乙酸乙酯進行提取，分別以HCl溶液、KOH-二氯甲烷體系進行兩次LLP凈化，依次消除提取液中的脂溶性雜質和水溶性雜質，最后進入GC-MS，采用電子轟擊源(EI)電離檢測。在選擇離子監測(SIM)模式下，以m/z148、176、204為定性離子，m/z204為定量離子進行結構確證和定量檢測。結果表明，左旋咪唑含量在0.25～3.0mg/L范圍內，方法的線性關系良好，相關系數為0.999；方法LOQ為5μg/kg；雞肝、鴨肝、兔肝和豬肝樣品中的加標回收率在76%～106%范圍內，RSD小于9%。Trehy等報道了采用GC-MS測定尿液中左旋咪唑殘留的方法，并用于因使用可卡因導致中性粒細胞減少或粒細胞缺乏癥的評價中。該方法在兩個不同的實驗室進行了驗證測試，當取樣量為5mL時，方法LOD為1ng/mL。Bertol等也采用GC-MS方法測定尿液中的左旋咪唑，并對左旋咪唑在馬、犬和人中的代謝進行了研究。樣品經LLE后，進GC-MS分析，3個碎片離子定性，LOQ為0.15ng/mL。

(7)液相色譜-質譜法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)

與LC的常規檢測器如UVD、PDA等相比較，質譜檢測器(MSD)選擇性好、靈敏度高、定性能力強，因而可以簡化實驗步驟，減少樣品預處理過程。

1)單極四極桿質譜(LC-MS)

Cannavan等建立了綿羊組織中左旋咪唑殘留的LC-熱噴霧(TSP)-MS檢測方法。色譜柱為Li-Chrospher 60 RP-select B(125mm×4mmid，5um)，流動相為含0.1mol/L醋酸銨的乙腈-四氫呋喃-三乙胺-水(350+50+2+598，v/v)，等度洗脫，流速1.0mL/min，TSP電離，選擇離子監測(SIM)模式下檢測，以[M+H]+離子(m/z205)定量。方法的LOD為5ng/g，在肝臟、腎臟和肌肉組織的平均回收率分別為93%、85%和 9%。

Jedziniak等建立了牛奶中左旋咪唑等20種咪唑類藥物的篩查方法。采用乙酸乙酯提取，正已烷和酸化乙醇LLP凈化，LC-MS測定。采用XTerra MS C18(150mm×2.1mm，3.5um)色譜柱分離，柱溫30℃，流動相為乙腈和0.025mol/L的乙酸銨溶液(乙酸調pH5.0)，梯度洗脫，流速0.2mL/min，在電噴霧正離子(ESIT)、SIM模式下檢測，以[M+H]+離子(m/z205)定量。在添加濃度5ug/kg、10μg/kg、15μg/kg范圍內，回收率在84%～89%之間，CV小于9.8%；LOD在0.1～1.0μg/kg之間，L0Q在0.5～2.0ug/kg之間。

2)串聯四極桿質譜(LC-MS/MS)

Baere等采用LC-MS/MS測定動物血漿中的左旋咪唑。以LiChrospher 60 RP-select B(125mm×34mmid.5μm)作為分離柱，含有7.7%(體積比)四氫呋喃和0.3%(體積比)三乙胺的0.1mol/L乙酸銨溶液-乙腈(60+40，v/v)作為流動相，流速0.2mL/min，MS/MS在ESI、多反應監測(MRM)模式下檢測，以甲基左旋咪唑作為內標定量。在0～0.5μg/mL范圍內線性關系良好，r大于0.99；LOQ為0.025μg/mL，LOD為0.009μg/mL；日內、日間CV在歐盟要求的范圍之內。Tong等建立了人血漿中左旋咪唑的LC-MS/MS檢測方法。采用HC-C18(150mm×4.6mm，5um)分離柱，40℃分離，流動相為乙腈-10mmol/L乙酸銨(70+30，v/v)，流速為0.5mL/min，ESI+、MRM模式檢測，以甲苯咪唑為內標定量。在0.1～30ng/mL范圍內線性良好，LOQ為0.1ng/mL，CV小于8.5%。

De Ruyck等建立了牛奶中左旋咪唑等驅蟲藥多殘留的LC-ESI-MS/MS檢測方法。采用Alltima C18(15mm×2.1mm，5um)作為分離柱，0.1%甲酸溶液-乙腈為流動相，梯度洗脫，流速為0.25mL/min，在ESIt、MRM模式下檢測，以甲苯咪唑為內標定量。左旋咪唑回收率在89.6%～102.9%之間，RSD在6.1%～8.3%之間，LOD為0.5μg/kg。薄海波等建立了UPLC-MSMS測定牛奶和奶粉中左旋咪唑殘留量的方法。采用BEH C18超高效液相色譜柱，以乙腈-0.1%甲酸(15+85，v/v)為流動相，流速為0.25mL/min，在ESI+、MRM模式下進行質譜分析。結果表明，在2.0～100.0μg/L濃度范圍內，呈良好的線性關系，相關系數r為0.997；在低、中、高3個添加水平下，回收率為64.5%～102.0%，RSD小于13.1%；牛奶中的LOD為0.4μg/kg，奶粉為2.0μg/kg。Whelan等報道了牛奶中驅蟲藥殘留的UPLC-快速極性切換-MS/MS檢測方法。分析柱為HSST3(100mm×2.1mm，1.8um)，流動相為0.01%冰醋酸-乙腈(90+10，v/v)和含5mmol/L甲酸銨的甲醇溶液-乙腈(75+25，v/v)，梯度洗脫，流速為0.6mL/min，質譜用ESI、MRM模式檢測，以氘代藥物作為內標定量。該方法使用電離子化的快速極性切換技術、單針進樣就可同時檢測正、負離子，運行時間為13min，能夠檢測包括左旋咪唑在內的幾乎所有驅蟲藥。方法的CCa為0.83μg/kg，CCβ為1.4μg/kg，回收率在94%～104%之間。

Garrido Frenich等采用UPLC-MS/MS方法同時測定雞蛋中包括咪唑類驅蟲藥在內的多種藥物殘留。分析柱為Acquity UPLC BEH C18(100mm×2.1mm，1.7um)，流動相為甲醇和0.05%的甲酸溶液，流速為0.3mL/min，進樣量5μL，柱溫30℃，毛細管電壓3.0kV，源溫度120℃，脫溶劑溫度350℃，錐孔氣流量80L/h，脫溶劑氣流量600L/h，ESI模式監測。在10μg/kg和100μg/kg兩個濃度水平下，左旋咪唑回收率分別為118.5%和94.8%，日間CV為14.6%，方法LOQ為0.1μg/kg。Cherlet等建立了豬組織中左旋咪唑殘留的LC-大氣壓化學電離(APCI)-MS/MS檢測方法。采用正已烷-異戊醇(95+5，v/v)提取豬組織中的左旋咪唑，以LiChrospher 60 RP-select B(125mm×34mm，5μm)為色譜分離柱，含有7.7%(體積比)四氫呋喃和0.3%(體積比)三乙胺的0.1mol/L乙酸銨溶液和乙腈為流動相，梯度洗脫，流速為1.0mL/min。質譜在正離子模式電離，對左旋咪唑主要離子產物m/z178.0進行選擇反應監測(SRM)模式檢測，用甲基左旋咪唑為內標定量。在豬肌肉、腎臟、皮膚+脂肪組織中的LOQ為5ug/kg，肝臟為50μg/kg；LOD在2～4μg/kg之間；日內CV小于20.1%，日間CV小于11.7%。Lopes等開發了同時檢測金頭鯛中左旋咪唑等32種獸藥殘留的方法。采用改進的QuEChERS方法提取，乙腈～甲醇(75+25，v/v)作為提取溶劑，UPLC-MS/MS測定。在10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg和100μg/kg添加濃度，方法平均回收率在69%～125%之間，日內和日間RSD分別小于20%和30%；LOD和LOQ分別為7.5μg/kg和25μg/kg，CCa為16.7ug/kg，CCβ為23.5ug/kg。

3)離子阱質譜(LC-MSn)

Gallo等報道了采用LC-MSn測定飼料中左旋咪唑的分析方法。樣品經LLE提取后，直接進儀器檢測。采用反相色譜分離，ESI電離，MSn測定。利用MSn可做多級質譜分析的特點，監測2個子離子。該方法按照歐盟法規882/2004/EC對重現性、耐用性、特異性和定量限進行實驗室內驗證，結果表明該方法可靠，適用于豬、牛、兔子和家禽飼料。該方法平均回收率超過92%，RSD小于15.2%；LOQ為2.0mg/kg。

4) 飛行時間質譜(LC-QTOF/MS)

Hess等報道了尿液中左旋咪唑及其代謝物阿米雷司的LC-QTOF/MS分析方法。該方法在2.5～250ng/mL范圍呈良好線性；左旋咪唑和阿米雷司的LOD分別為0.51ng/mL、0.65ng/mL，LOQ為1.02ng/mL和0.76ng/mL；方法準確度為-1.96%～-14.3%(左旋咪唑)、-11.9%～-18.5%(阿米雷司)，日間精密度為8.36%～10.9%(左旋咪唑)、5.75%～11.0%(阿米雷司)，日內精密度為10.9%～16.9%(左旋咪唑)、7.64%～12.7%(阿米雷司)。

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